GRβ shRNA稳定表达胶质瘤细胞株的构建及功能初探

作     者：王倩 邹健 谢平 Wang Qian;Zou Jian;Xie Ping

作者机构：南京医科大学附属无锡人民医院中心实验室江苏无锡214023 

基　　金：国家自然科学基金(81000527) 无锡市科技发展指令性计划(CSEY1N1101) 

出 版 物：《南京医科大学学报（自然科学版）》 (Journal of Nanjing Medical University(Natural Sciences))

年 卷 期：2014年第34卷第7期

页      码：883-888页

摘      要：目的:构建并鉴定糖皮质激素受体β(GRβ)RNA干扰稳定表达胶质瘤细胞株,研究GRβ对胶质瘤细胞周期及增殖的影响。方法:根据GRβmRNA序列设计特异性小干扰RNA(siRNA),以LipofectamineTM 2000转染人胶质瘤细胞,RT-PCR及Western blot鉴定其有效性;体外合成该siRNA插入序列小发卡RNA(shRNA)并定向克隆至真核表达载体pGPH1/GFP/Neo,转染后,通过G418筛选稳定表达细胞株(G0306),Western blot检测GRβ表达、MTS和流式细胞术检测GRβ干扰对胶质瘤细胞增殖及细胞周期的影响。结果:GRβsiRNA能有效抑制GRβ的表达,DNA测序证实合成并克隆入真核表达载体pGPH1/GFP/Neo的shRNA序列完全正确;GRβshRNA稳定表达人胶质瘤细胞株阻滞于G1期、细胞增殖能力显著下降。结论:成功构建人GRβshRNA稳定表达胶质瘤细胞株(G0306),初步表明GRβ影响胶质瘤细胞的增殖,为后期研究GRβ在中枢神经系统肿瘤中的作用及机制奠定了基础。

主 题 词：糖皮质激素受体β 小干扰RNA 稳定表达 增殖 胶质瘤 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.7655/NYDXBNS20140706

馆 藏 号：203142731...