甲型流感病毒M_2蛋白胞外功能区真核表达质粒的构建和表达分析

作     者：王丰平 李明远 李燕 张卫东 李虹 蒋忠华 李婉宜 WANG Feng-ping;LI Ming-yuan;LI Yan;ZHANG Wei-dong;LI Hong;JIANG Zhong-hua;LI Wanyi

作者机构：四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室四川成都610041 

出 版 物：《中国病原生物学杂志》 (Journal of Pathogen Biology)

年 卷 期：2006年第1卷第5期

页      码：327-330,F0004页

摘      要：目的构建流感病毒M2蛋白胞外功能区(M2e)真核表达质粒,并研究其在真核细胞中的表达。方法根据Genbank(NCBI ISDN13425)中查得的M2e编码序列,设计并合成两条DNA单链;在两条链两端添加碱基构成酶切位点的粘性末端,退火后使之互补结合成为M2e编码序列;然后将其插入到经双酶切的真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)-M2e;经酶切和DNA测序鉴定后,转染HEK293细胞,用免疫荧光技术检测pcD-NA3.1(+)-M2e在HEK293细胞的表达,并通过MTT检测刺激淋巴细胞增殖及M2e蛋白的分泌情况。结果合成的寡核苷酸链经退火形成双链,插入酶切的真核表达载体后构建成pcDNA3.1(+)-M2e。免疫荧光技术证实该质粒表达的M2e蛋白定位于细胞膜上,转染细胞的培养上清经MTT实验证实能刺激淋巴细胞增殖,表明表达的M2e蛋白也可分泌至细胞外。结论成功构建了流感病毒M2e的真核表达质粒pcDNA3.1(+)-M2e,表达的M2e蛋白不仅存在于细胞膜上,也可分泌到细胞外。流感病毒M2e基因真核表达质粒的构建及成功表达为流感病毒基因工程疫苗、通用疫苗和核酸疫苗的研究奠定了基础。

主 题 词：甲型流感病毒 M2e基因 真核表达载体 免疫荧光技术 淋巴细胞增殖实验 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1673-5234.2006.05.003

馆 藏 号：203142760...