PTHrP基因靶向RNA干扰重组表达质粒的构建鉴定以及在HTB-94细胞中的功能检测

作     者：秦宏敏 韩会峰 沙广钊 Qin Hongmin;Han Huifeng;Sha Guangzhao

作者机构：徐州医学院附属医院创伤骨科江苏省徐州市221002 江苏邳州第一人民医院 

基　　金：江苏省自然科学基金(05KJB320135) 江苏省高校自然科学研究基金资助项目(BK2005015) 

出 版 物：《中国骨与关节损伤杂志》 (Chinese Journal of Bone and Joint Injury)

年 卷 期：2008年第23卷第7期

页      码：564-566页

摘      要：目的构建针对目的基因PTHrp的pSilencer3.1-H1neo siRNA(small interfering RNA)表达质粒,并在人体软骨肉瘤细胞HTB-94中观察其干扰效果。方法设计并合成针对PTHrP基因编码区的含有发卡结构的互补的寡核苷酸链,体外退火后克隆入经BamHⅠ,HindⅢ双酶切线性化的干扰载体pSilencerTM3.1H1neo中,对重组质粒进行酶切分析和DNA系列测定。结果双酶切证实PTHrP siRNA表达质粒克隆构建成功,插入片段测序结果与合成的siRNA结果一致,同时干扰了PTHrP基因的mRNA和蛋白的表达。结论成功构建的靶向RNA干扰重组表达质粒,可以通过小RNA序列干扰靶向基因的mRNA转录,降低靶向基因在细胞中mRNA和蛋白的表达。

主 题 词：siRNA(PTHrp)质粒构建 RNA干扰 PTHrp蛋白和mRNA表达 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 07[理学] 100103[100103] 071007[071007] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1672-9935.2008.07.012

馆 藏 号：203143220...