应用Red重组技术构建四环素抗性多基因串联表达载体

作     者：何彰华 师明磊 王洋 叶丙雨 黄芬 张彦 范秋声 王东 肖丽霞 张乐之 李德彬 闫兴 赵志虎 HE Zhang-hua;SHI Ming-lei;WANG Yang;YE Bing-yu;HUANG Fen;ZHANG Yan;FAN Qiu-sheng;WANG Dong;XIAO Li-xia;ZHANG Le-zhi;LI De-bin;YAN Xing;ZHAO Zhi-hu

作者机构：军事医学科学院生物工程研究所北京100071 

基　　金：国家重大新药创制关键技术平台(2008ZXJ09007-01) 

出 版 物：《军事医学》 (Military Medical Sciences)

年 卷 期：2011年第35卷第10期

页      码：754-757,799页

摘      要：目的构建一种四环素抗性的多基因串联表达载体。方法设计同源臂引物,通过重叠延伸PCR获取含四环素抗性基因的打靶序列,应用pKD46介导的Red重组系统,在DH5α内替换多基因串联表达载体pET-m28a(+)中的抗性基因序列;再利用同尾酶(isocaudarner)策略,将sfp和accA1两基因串联组合于pET-mt28a(+)中,并进行共表达鉴定。结果获得了含四环素抗性的重组质粒pET-mt28a(+);构建了两基因串联重组质粒pET/sfp/accA1-mt28a(+),且两基因能够在同一载体上协同表达。结论成功构建了一种四环素抗性表达载体pET-mt28a(+),并可介导多基因的协同表达,为红霉素合成通路在大肠杆菌中的重建奠定了基础。

主 题 词：四环素抗药性 多基因串联表达载体 Red重组 质粒 红霉素 

学科分类：1007[医学-药学类] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3969/j.issn.1674-9960.2011.10.009

馆 藏 号：203143275...