植物乳杆菌表达重组新冠病毒M抗原表位及免疫原性分析

作     者：邓安琦 叶丹妮 艾雪言 唐秀兰 陈文聪 陈嘉豪 郝嘉翼 邓玲聪 李昌 陈永福 金俊杰 王茂鹏 DENG Anqi;YE Danni;AI Xueyan;TANG Xiulan;CHEN Wencong;CHEN Jiahao;HAO Jiayi;DENG Lingcong;LI Chang;CHEN Yongfu;JIN Junjie;WANG Maopeng

作者机构：温州大学病毒学研究所温州市病毒学与免疫学重点实验室浙江温州325035 中国农业科学院长春兽医研究所吉林长春130122 内蒙古农业大学乳品生物技术与工程教育部重点实验室内蒙古呼和浩特010018 温州科技职业学院(温州市农业科学研究院)浙江温州325006 

基　　金：国家重点研发计划(2022YFC2604204) 国家生猪技术创新中心先导科技项目(NTCIP-XD/B11) 温州市特派员专项(X2023085,N2023076) 温州市农业丰收计划(FSJH2022003) 

出 版 物：《中国兽医学报》 (Chinese Journal of Veterinary Science)

年 卷 期：2024年第44卷第8期

页      码：1719-1727页

摘      要：新型冠状病毒(SARS-CoV-2)是引起新冠肺炎的病原体,其变异快、传播强,导致疫情广泛流行,以疫苗接种为主要防控措施。尽管已有大量新冠肽表位疫苗和黏膜型疫苗的研究,但靶向黏膜的肽表位疫苗和其功能评价的研究鲜有报道。本研究以IEDB数据库预测SARS-CoV-2结构蛋白M肽表位作为抗原靶点,设计含3050及1229信号肽和DCpep优化的MS-3S基因,插入MS2噬菌体衣壳蛋白中,通过PCR和无缝克隆技术构建表达质粒pSIP:MS-3S,转化到植物乳杆菌LP18中获得重组菌LP18:MS-3S。通过对诱导时间、诱导剂质量浓度、转速和初始pH值等表达条件进行优化及鼻内免疫实验,验证重组菌免疫效果。结果显示,获得出916 bp修饰和优化的目的基因MS-3S,并成功构建重组菌LP18:MS-3S,经Western blot、流式细胞术、免疫荧光等检测方法验证,获得重组蛋白表达的最佳条件:诱导时间为4 h,诱导肽质量浓度为100μg/L,培养基初始pH值为7.0,转速为100 r/min。通过ELISA试验验证,在小鼠的血清、肺泡灌洗液和粪便稀释液中,检测出抗肽表位的特异性抗体。本研究成功构建了1株表达新冠M蛋白肽表位抗原的重组菌,并且可诱导机体产生体液和黏膜免疫,为新冠黏膜免疫候选疫苗的研制奠定了基础。

主 题 词：SARS-CoV-2 M蛋白 肽表位 植物乳杆菌 鼻内免疫 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.16303/j.cnki.1005-4545.2024.08.19

馆 藏 号：203143386...