油棕SCoT-PCR反应体系的建立与优化

作     者：曾精 黄成龙 王冰洁 潘登浪 曾宪海 Zeng Jing;Huang Chenglong;Wang Bingjie;Pan Denglang;Zeng Xianhai

作者机构：中国热带农业科学院橡胶研究所农业农村部儋州油棕种质资源圃海南省油棕种质资源圃海口571101 中国热带农业科学院环境与植物保护研究所海口571101 中国热带农业科学院海口571101 

基　　金：海南省自然科学基金项目(320QN352) 海南省自然科学基金高层次人才项目(322RC787)共同资助 海南省重点研发计划项目(ZDYF2021XDNY293) 

出 版 物：《分子植物育种》 (Molecular Plant Breeding)

年 卷 期：2024年第22卷第21期

页      码：7067-7075页

摘      要：为获得油棕SCoT-PCR反应的最佳反应体系以及筛选适用于该体系的SCoT引物,本研究首先通过利用L16(45)正交设计试验和单因素实验2种方法,对反应体系中的各因子进行优化,并在此基础上确定最优退火温度和循环数。结果表明,各因子对SCoT-PCR扩增影响大小依次为:dNTPs浓度>Mg^(2+)浓度>DNA模板量>Taq DNA聚合酶量>引物浓度;最佳反应体系(25μL)为:DNA模板量为120 ng,dNTPs浓度为0.2 mmol/L,Mg^(2+)浓度为1.5 mmol/L,引物浓度为0.6μmol/L,Taq DNA聚合酶量为2.0 U,其余用灭菌ddH_(2)O补足至25μL。最优扩增程序为:95℃预变性3 min;95℃变性30 s,55℃退火复性30 s,72℃延伸1 min,30个循环;最终72℃延伸5 min,保存于4℃恒温冰箱中。此外,利用优化体系从36条SCoT引物中筛选出30条可从油棕中扩增条带清晰的引物。使用SCoT-2等3条引物对30份油棕材料进行扩增,扩增产物均具有良好的多态性、可靠性和稳定性。本研究结果为油棕种质资源鉴定、遗传多样性分析以及品种遗传图谱构建等提供理论依据。

主 题 词：油棕 SCoT-PCR 正交设计 单因素实验 体系验证 

学科分类：09[农学] 0901[农学-植物生产类] 

D　O　I：10.13271/j.mpb.022.007067

馆 藏 号：203143596...