单核细胞增生性李斯特菌iap基因克隆和PCR条件优化

作     者：贾芙蓉 罗雁非 方玲 郑岚 刘伟林 潘洪涛 何成彦 JIA Fu-rong;LUO Yan-fei;FANG Ling;ZHENG Lan;HU Wei-lin;PAN Hong-tao;HE Cheng-yan

作者机构：解放军第208医院检验科长春130062 吉林省出入境检验检疫局 吉林大学中日联谊医院检验科 

出 版 物：《中华生物医学工程杂志》 (Chinese Journal of Biomedical Engineering)

年 卷 期：2010年第16卷第3期

页      码：223-226页

摘      要：目的构建单核细胞增生性李斯特菌Listeriamonocytogenes54002—4株p60蛋白iap基因原核克隆载体。方法利用自行设计的引物通过梯度PCR优化扩增条件，扩增出单核细胞增生性李斯特菌54002—4株的iap基因。在iap基因的5’端和3’端分别引入BamHI和XhoI2个酶切位点，琼脂糖凝胶电泳分析、回收PCR产物，并将回收纯化的PCR产物与pMD18．T载体进行连接。将该重组质粒转化入大肠杆菌JMl09感受态细胞，经1mmol／LIPTG诱导4～6h后，观察转化效果。结果培养无色菌落细菌，提取质粒，经PCR鉴定和核苷酸序列测定后确定获得阳性重组质粒pMDl8-T—IaP。结论通过梯度PCR摸索出最佳反应条件，建立PCR优化条件和方法，经转化获得iap基因克隆载体。

主 题 词：聚合酶链式反应 质粒 单核细胞增生性李斯特菌 iap基因 原核克隆载体 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.3760/cma.j.issn.1674-1927.2010.03.011

馆 藏 号：203144080...