鸡IL-6、IL-17和IFN-γ实时荧光定量PCR检测方法的建立

作     者：张昆丽 谢芝勋 滕丽琼 谢丽基 刘加波 范晴 庞耀珊 罗思思 谢志勤 邓显文 

作者机构：广西大学动物科学技术学院南宁530005 广西兽医研究所/广西畜禽疫苗新技术重点实验室南宁530001 

基　　金：国家自然科学基金项目(31160512) 广西科技攻关项目(桂科重1222003-2-4 桂科攻10100014-5) 广西特聘专家专项项目(2011B020) 

出 版 物：《南方农业学报》 (Journal of Southern Agriculture)

年 卷 期：2013年第44卷第10期

页      码：1740-1745页

摘      要：【目的】建立针对鸡白介素6(IL-6)、白介素17(IL-17)和γ干扰素(IFN-γ)的实时荧光定量PCR检测方法,为细胞因子的定量检测及病毒致病机制的研究奠定基础。【方法】根据GenBank已发表的鸡IL-6、IL-17、IFN-γ和3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)基因保守序列,设计并合成4对相应的特异性引物,以鸡胚成纤维细胞的cDNA为模板构建重组质粒,对退火温度、引物浓度等SYBR Green I实时荧光定量PCR反应条件进行优化,建立各基因的标准曲线,并进行特异性、敏感性、重复性试验。【结果】GAPDH、IL-6、IL-17和IFN-γ的SYBR Green I实时荧光定量PCR扩增效率分别是98.2%、99.2%、102.0%和100.8%,相应的标准误差为0.00666、0.00813、0.00365和0.00458。特异性试验结果显示各基因的溶解曲线均呈单一溶解峰,敏感性试验结果表明各基因的检测下限均为100拷贝,重复性试验结果表明组内变异系数均小于2.00%。【结论】建立的SYBR Green I实时荧光定量PCR具有敏感性高、重复性好、特异性强等特点,为快速检测和定量鸡源IL-6、IL-17和IFN-γ的表达水平提供了技术平台。

主 题 词：鸡 IL-6 IL-17 IFN-γ 实时荧光定量PCR 

学科分类：090603[090603] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.3969/j:issn.2095-1191.2013.10.1740

馆 藏 号：203144218...