狂犬病病毒糖蛋白在昆虫细胞中的表达及其免疫学特性分析

作     者：王晓蕾 陈芳芳 袁伟 钱国强 耿以如 张晓 杨瑾 熊四平 陈雅 唐奇 仇镇宁 冯振卿 朱进 

作者机构：南京医科大学病理学系江苏南京210029 南京医科大学卫生部抗体技术重点实验室.江苏南京210029 江阴力博医药生物技术有限公司江苏江阴214400 南京军区军事医学研究所江苏南京210002 

基　　金：国家自然科学基金项目(81273325,81202370) 江苏省社会发展项目(BE2011842) 大学生创新计划(Ky101J201217) 

出 版 物：《南京医科大学学报（自然科学版）》 (Journal of Nanjing Medical University(Natural Sciences))

年 卷 期：2015年第35卷第6期

页      码：772-776,822页

摘      要：目的 :利用Bac-To-Bac杆状病毒昆虫细胞表达系统对狂犬病病毒糖蛋白(rabies virus glycoprotein,RVG)基因进行克隆、表达、纯化,并对重组RVG进行免疫学特性鉴定。方法:参照Gen Bank收录的狂犬病病毒CVS-11株RVG基因序列,设计特异性引物,扩增目的基因。RVG基因经Bam HⅠ/KpnⅠ双酶切后定向克隆到p Fast Bac-GP67B载体上,阳性重组转座质粒进一步转化*** DH10Bac感受态细胞,经蓝白斑筛选及PCR鉴定后获得重组穿梭载体r Bacmid-RVG,将其转染至对数生长期的Sf-9昆虫细胞,进行重组RVG的真核表达。His-Trap HP纯化目的蛋白,SDS-PAGE和Western blot进行鉴定。重组RVG免疫小鼠,检测其免疫原性和血清中和活性。结果:用Bac-To-Bac杆状病毒昆虫细胞表达系统表达并纯化了重组RVG,分子量约58 000。经重组RVG免疫后的小鼠血清具有中和活性。结论:重组RVG具有天然RVG的活性,为进一步研制亚单位疫苗及制备筛选中和抗体奠定了基础。

主 题 词：狂犬病病毒 狂犬病病毒糖蛋白 Bac-To-Bac杆状病毒昆虫细胞表达系统 纯化 抗体 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100102[100102] 10[医学] 

D　O　I：10.7655/NYDXBNS20150603

馆 藏 号：203144861...