重组CYP2D26主要B细胞表位在Ⅱ型自身免疫性肝炎小鼠模型构建中的效应研究

作     者：刘馨 王辉辉 何秋玲 马雁冰 LIU Xin;WANG Hui-hui;HE Qiu-ling;MA Yan-bing

作者机构：中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所昆明650118 

基　　金：云南省应用基础研究面上项目(2010CD135) 重点项目(2011FA023) 

出 版 物：《中国医药生物技术》 (Chinese Medicinal Biotechnology)

年 卷 期：2013年第8卷第1期

页      码：24-28页

摘      要：目的研究在大肠杆菌中以重组病毒样颗粒形式表达的人II型自身免疫性肝炎标志蛋白CYP2D6主要抗原表位aa262-270免疫小鼠后对构建小鼠自身免疫性肝炎模型的效应。方法设计人II型自身免疫性肝炎标志蛋白主要抗原表位aa262-270(WDPAQPPRD)的正负链寡核苷酸片段,经退火后插入表达乙肝核心蛋白HBcAg的质粒pNP中(pNP质粒由pThioHisA质粒插入HBcAg基因片段构建而成)。构建成质粒pNP-AIH2;转染大肠杆菌DH5α感受态细胞;以IPTG诱导重组蛋白表达,经硫酸铵沉淀、洗涤,密度梯度离心纯化和脱盐后,肌肉注射免疫小鼠3次,以ELISA和western blot检测免疫后小鼠特异性抗体的产生和水平,通过转氨酶检测和肝脏石蜡切片HE染色观察炎症反应。结果 SDS-PAGE结果显示重组菌诱导表达的目的蛋白分子量为19kD,与预期相符;电镜证实其以可溶性的病毒样颗粒形式存在;ELISA显示,免疫小鼠血清与包被的肝脏匀浆蛋白特异反应,检测到持续存在的特异抗体,滴度至少为1:2000;western blot检测表明,抗血清在分子量约为55kD的地方产生了一个特异的条带,与小鼠CYP2D6蛋白大小一致。与正常对照相比,实验组小鼠转氨酶水平未明显升高,肝切片HE染色没有观测到明显的病理特征。结论携带人II型自身免疫性肝炎标志蛋白CYP2D26主要表位的病毒样颗粒免疫小鼠后,可刺激产生较强的特异抗体水平,但在观测时间内,未见诱导小鼠产生明显的肝脏炎症反应。

主 题 词：肝炎 自身免疫性 表位 B淋巴细胞 细胞色素P450 CYP2D6 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100201[100201] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2013.01.006

馆 藏 号：203145727...