幽门螺杆菌多表位重组原核表达工程菌的构建及表达特性研究

作     者：丁娜娜 杨靖 潘兴 周永君 李建春 祝捷 王保宁 李明远 

作者机构：四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室成都610041 四川万可泰生物技术有限责任公司成都610000 湖北医药学院微生物学教研室十堰442000 

基　　金：四川省科技厅科技支撑计划项目(No.2014SZ0036) 湖北省教育厅科学技术研究项目(No.B2013115)资助 

出 版 物：《四川大学学报（医学版）》 (Journal of Sichuan University(Medical Sciences))

年 卷 期：2014年第45卷第3期

页      码：367-370页

摘      要：目的构建含有幽门螺杆菌尿素酶(UreI、UreB)及粘附素(HpaA)的多表位原核表达质粒pET28a(+)/ureI-ureB-hpaA〔pET28a(+)/IBA〕及相应的原核表达工程菌,研究其表达特性。方法通过生物信息学方法从ureI、ureB和hpaA基因中筛选T细胞和B细胞优势表位基因序列,人工合成并构建原核重组表达质粒pET28a(+)/IBA。经限制性内切酶(NdeⅠ,XhoⅠ)酶切鉴定及DNA测序鉴定后导入大肠杆菌BL21(DE3)。该工程菌经IPTG诱导后,用SDS-PAGE检测重组蛋白(rIBA)的表达情况,以抗幽门螺杆菌悉尼株(SS1株)特异卵黄抗体采用Western blot检测rIBA的抗原性。结果构建的多表位原核表达质粒pET28a(+)/IBA双酶切和测序鉴定与设计序列100%一致。工程菌经IPTG诱导后SDS-PAGE电泳显示在相对分子质量40×103左右有一条明显蛋白条带,Western blot显示有相应位置特异反应条带。结论成功构建幽门螺杆菌多表位重组原核表达质粒pET28a(+)/IBA及相应原核表达工程菌,该工程菌表达的rIBA具有抗原性,表明该重组蛋白与幽门螺杆菌有高度相关性。

主 题 词：幽门螺杆菌 表位 尿素酶 粘附素 工程菌 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.13464/j.scuxbyxb.2014.03.003

馆 藏 号：203145779...