藤黄生孢链霉菌NRRL 2401遗传操作系统和基因文库的构建

作     者：成雪晴 朱涛 邓子新 由德林 Xueqing Cheng;Tao Zhu;Zixin Deng;Delin You

作者机构：上海交通大学生命科学技术学院微生物代谢国家重点实验室上海200240 

基　　金：国家自然科学基金(31170085) 国家“973项目”(2012CB721004)~~ 

出 版 物：《微生物学报》 (Acta Microbiologica Sinica)

年 卷 期：2016年第56卷第2期

页      码：209-218页

摘      要：【目的】建立藤黄生孢链霉菌NRRL 2401的遗传操作系统和基因文库,以便筛选次级代谢产物生物合成基因。【方法】利用大肠杆菌和链霉菌的属间接合转移的方法,以整合型载体pPM927、pSET152和复制型载体pJTU1278构建链霉菌遗传操作系统。以pCClFOS^(TM)载体,大肠杆菌EP1300^(TM)-T1~R为宿主菌构建Fosmid文库。随后,设计引物,利用"板池-行池-单克隆"的三级PCR方法对文库进行快速筛选。【结果】pPM927、pSET152和pJTU1278均成功转入藤黄生孢链霉菌NRRL 2401,其中pSET152载体的转化效率最高。构建了稳定高效的藤黄生孢链霉菌NRRL 2401的基因文库,含2880个克隆,平均插入片段大小约为35 kb,空载率小于1%,文库覆盖率为99.99%,覆盖基因组16.5倍。同时,初步筛选出可能含有吲哚霉素生物合成基因簇的9个阳性克隆。【结论】成功构建了稳定高效的藤黄生孢链霉菌NRRL 2401遗传操作系统和高质量的基因文库,为克隆该菌中次级代谢产物生物合成基因簇以及进一步遗传改造奠定了基础。

主 题 词：藤黄生孢链霉菌 接合转移 基因文库 PCR筛选 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 1002[医学-临床医学类] 07[理学] 071007[071007] 

核心收录：

D　O　I：10.13343/j.cnki.wsxb.20150221

馆 藏 号：203145865...