沙眼衣原体pORF5质粒蛋白免疫优势片段的筛选与鉴定

作     者：何战胜 邹燕 粟胜梅 雷文波 李忠玉 HE Zhan-Sheng;ZOU Yan;SU Sheng-Mei;LEI Wen-Bo;LI Zhong-Yu

作者机构：南华大学医学院病原生物学研究所/特殊病原体防控湖南省重点实验室衡阳421001 

基　　金：国家自然科学基金(No.81102230,No.31470277) 湖南省高校创新平台开放基金(13K081) 湖南省重点研发计划(2015JC3087) 湖南省高层次卫生人才“225”工程培养项目(2013-13) 湖南省普通高校带头人培养项目(2014-186) 特殊病原体防控湖南省重点实验室(2014-5) 湖南省高等学校“分子靶标新药研究”协同创新中心(2014-405)资助项目 

出 版 物：《中国免疫学杂志》 (Chinese Journal of Immunology)

年 卷 期：2016年第32卷第1期

页      码：59-64页

摘      要：目的:鉴定沙眼衣原体pORF5质粒蛋白的免疫原性,并进一步筛选和确定pORF5质粒蛋白免疫优势片段。方法:以沙眼衣原体D血清型DNA为模板,设计pORF5基因全长和9个不同片段特异引物进行PCR扩增,PCR产物经Bam HⅠ、NotⅠ双酶切后插入经同样双酶切的原核表达载体pGEX-6p中,构建pORF5质粒蛋白不同长度片段的原核表达重组体,重组体经PCR和测序鉴定后,转化XL1 Blue大肠杆菌表达10种不同长度的GST融合蛋白;ELISA方法检测pORF5质粒蛋白的免疫原性,Western blot鉴定pORF5质粒蛋白的免疫反应性;ELISA测定10个不同片段与沙眼衣原体生殖道感染患者血清、鼠免疫血清以及抗pORF5单克隆抗体的免疫反应性,鉴定pORF5质粒蛋白免疫优势片段。结果:pORF5质粒蛋白免疫原性强,能刺激机体产生高效价抗体;破坏pORF5质粒蛋白天然空间结构,其免疫反应性基本消失;在ELISA反应中,N端缺失66氨基酸的F6片段的免疫反应强度与pORF5全长基本相似,F2与F3出现较弱的免疫反应,其余片段免疫反应消失。结论:pORF5质粒蛋白为构象依赖性免疫优势抗原,其免疫优势表位和构象表位位于C端,本研究为进一步探讨pORF5质粒蛋白的生物学功能和疫苗的研制提供实验依据。

主 题 词：沙眼衣原体 pORF5质粒蛋白 免疫原性 免疫优势表位 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3969/j.issn.1000-484X.2016.01.013

馆 藏 号：203145867...