吉林地区华支睾吸虫虫卵的鉴定及PCR检测方法的建立

作     者：唐艺芝 郝玉花 孙青松 彭鹏 吴秀萍 王学林 刘明远 TANG Yi-zhi;HAO Yu-hua;SUN Qing-song;PENG Peng;WU Xiu-ping;WANG Xue-lin;LIU Ming-yuan

作者机构：吉林大学人兽共患病研究所/教育部重点实验室长春130062 吉林大学第一临床学院长春130062 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(NSFC30700600) 吉林省科技厅基金资助项目(20060417) 

出 版 物：《湖北农业科学》 (Hubei Agricultural Sciences)

年 卷 期：2013年第52卷第7期

页      码：1601-1603,1606页

摘      要：对华支睾吸虫病流行地区人粪样进行华支睾吸虫(Clonorchis sinensis)虫卵的鉴定、收集及DNA的提取,然后根据华支睾吸虫基因设计两对特异性引物,以粪便中提取的虫卵DNA为模板,采用聚合酶链式反应(PCR)方法扩增目的基因片段,对PCR方法的各种反应条件进行优化。结果两对引物中以上游引物(5′-TGGCCTGACTGGCTGGCCGG-3′)、下游引物(5′-CGGCACCCCACACACATACA-3′)为最适引物,用PCR方法可扩增到分子量大小为255 bp的特异性条带,测序结果经BLAST工具进行分析,与中国沈阳分离株(AF217099)和朝鲜分离株(AF217094)的同源性为100%;50μL PCR反应体系的最优化反应条件为:dNTP 2.6μL;10×PCR Buffer(含Mg2+)4.0μL;上下游引物各0.5μL;DNA模板5.5μL;Taq DNA聚合酶0.4μL。扩增程序为:94℃预变性5 min,94℃变性30 s,56℃退火1 min,72℃延伸30 s,30个循环,72℃延伸5 min,4℃保存。试验成功对吉林地区人粪样中华支睾吸虫虫卵进行了鉴定,并建立了华支睾吸虫虫卵PCR检测方法,为从分子生物学角度检测华支睾吸虫病提供了理论依据。

主 题 词：华支睾吸虫(Clonorchis sinensis) 虫卵DNA 鉴定 PCR 

学科分类：09[农学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.0439-8114.2013.07.032

馆 藏 号：203146332...