载体法筛选乙型肝炎病毒S基因小干扰RNA靶位体系的建立

作     者：羊正纲 陈智 徐宁 倪勤 潘修成 金晗英 李敏伟 

作者机构：浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所310003 

基　　金：国家自然科学基金(30371270) 浙江省科技厅重大项目(2003C13015) 

出 版 物：《中华肝脏病杂志》 (Chinese Journal of Hepatology)

年 卷 期：2004年第12卷第9期

页      码：515-518页

摘      要：目的 构建4个针对乙型肝炎病毒(HBV)S基因序列的小发夹RNA(shRNA)表达载体,作用于增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和HBV S基因融合表达载体,观察shRNA对融合蛋白的抑制作用,筛选出有效靶位。 方法 利用pAVU6+27质粒,设计并构建4个shRNA表达载体,与融合表达载体共转染AD293细胞,荧光显微镜下观察融合蛋白的荧光表达情况并通过流式细胞仪分析shRNA对融合蛋白的抑制作用。同时,逆转录聚合酶链反应法验证其筛选的有效性。 结果 成功构建shRNA表达载体和HBs-EGFP融合表达载体;4组shRNA表达载体均可不同程度抑制融合基因的表达,其中以579位点最有效,荧光表达抑制率为69.8％,RNA水平抑制率为74.6％。 结论 筛选出有效抑制HBV S基因的siRNA靶位。

主 题 词：小干扰RNA 靶位 HBV 乙型肝炎病毒S基因 融合表达载体 筛选 抑制作用 EGFP 融合蛋白 增强型绿色荧光蛋白 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1004[医学-公共卫生预防医学类] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 100401[100401] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3760/j.issn:1007-3418.2004.09.002

馆 藏 号：203146683...