人组织因子基因RNA干扰载体的构建与鉴定

作     者：唐雯 熊石龙 杨红玲 包杰 杜江 花少栋 孙学刚 封志纯 TANG Wen;XIONG Shi-long;YANG Hong-ling;BAO Jie;DU Jiang;HUA Shao-dong;SUN Xue-gang;FENG Zhi-chun

作者机构：南方医科大学珠江医院儿科广东广州510282 南方医科大学南方医院检验医学中心广东广州510515 南方医科大学中医药学院中医症候实验室广东广州510515 北京八一儿童医院北京100700 

出 版 物：《南方医科大学学报》 (Journal of Southern Medical University)

年 卷 期：2007年第27卷第7期

页      码：1065-1067,1070页

摘      要：目的构建人组织因子基因RNA干扰载体,为达到阻止凝血过程的启动打下基础。方法利用Invitrogen公司在线软件设计人组织因子基因(NM_001993)干扰片段,合成shRNA序列,再制备双链寡核苷酸(dsoligo),退火后形成的dsoligo双链克隆到pENTRTM/U6载体的粘性末端,连接产物转化到感受态细胞,增菌,质粒DNA小提、测序。将构建的载体转染到脐静脉内皮细胞,应用RT-PCR和免疫荧光验证载体对目的基因的干扰情况。结果测序证实阳性克隆为pENTRTM/U6-TF-shRNA,转染到脐静脉内皮细胞后组织因子的表达受到明显抑制。结论成功构建出凝血途径的人组织因子基因RNA干扰载体,为研究组织因子基因RNA干扰载体在凝血疾病中的应用提供了稳定的转染细胞载体。

主 题 词：组织因子基因 RNA干扰载体 内皮细胞 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 1001[医学-基础医学] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3321/j.issn:1673-4254.2007.07.027

馆 藏 号：203147020...