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单核细胞增生李斯特菌与志贺菌双重实时PCR检测技术的建立

单核细胞增生李斯特菌与志贺菌双重实时PCR检测技术的建立

作     者:徐伟 李素芳 刘军 胡巅 XU Wei;LI Su-fang;LIU Jun

作者机构:中国计量学院生命科学学院杭州310018 河南省疾病预防控制中心 

基  金:国家质量监督检验检疫总局科研项目(2004QK36) 浙江省新苗人才计划项目(2007G60G2080005) 

出 版 物:《中华微生物学和免疫学杂志》 (Chinese Journal of Microbiology and Immunology)

年 卷 期:2008年第28卷第10期

页      码:946-950页

摘      要:目的建立一种快速、特异、灵敏、准确定量的单核细胞增生(单增)李斯特菌(Listeria monocytogenes)与志贺菌(Shigella)同步检测方法。方法分别根据单增李斯特菌溶血素O基因hly与志贺菌侵袭性质粒抗原H基因ipaH设计合成引物和探针。构建重组质粒pGEM—T—hly与pGEM—T—ipaH,并以EcoRⅠ单酶切使环状重组质粒线性化作为标准品。优化反应体系,分析特异性。双重荧光定量PCR对人工污染的脱脂灭菌乳进行检测。结果成功构建了重组质粒标准品,并运用5’、3’端分别标记FAM、TAMRA的hly基因探针和5’、3’端分别标记HEX、TAMRA的ipaH基因探针成功建立了单增李斯特菌与志贺菌同步荧光定量PCR检测方法。结论建立的方法有较强的特异性,线性范围好(10^5~10^1 copies/ul,R^2≥0.998),灵敏度为10copies/PCR,同步检测人工污染脱脂灭菌乳的灵敏度为10^2CFU/ml。

主 题 词:双重荧光定量PCR 单核细胞增生李斯特菌 志贺菌 食品检测 

学科分类:1002[医学-临床医学类] 1010[医学-医学技术类] 100215[100215] 10[医学] 

核心收录:

D O I:10.3321/j.issn:0254-5101.2008.10.020

馆 藏 号:203147059...

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