单核细胞增生李斯特菌与志贺菌双重实时PCR检测技术的建立
作者机构：中国计量学院生命科学学院杭州310018 河南省疾病预防控制中心
基 金：国家质量监督检验检疫总局科研项目(2004QK36) 浙江省新苗人才计划项目(2007G60G2080005)
出 版 物：《中华微生物学和免疫学杂志》 (Chinese Journal of Microbiology and Immunology)
年 卷 期：2008年第28卷第10期
页 码：946-950页
摘 要：目的建立一种快速、特异、灵敏、准确定量的单核细胞增生（单增）李斯特菌（Listeria monocytogenes）与志贺菌（Shigella）同步检测方法。方法分别根据单增李斯特菌溶血素O基因hly与志贺菌侵袭性质粒抗原H基因ipaH设计合成引物和探针。构建重组质粒pGEM—T—hly与pGEM—T—ipaH，并以EcoRⅠ单酶切使环状重组质粒线性化作为标准品。优化反应体系，分析特异性。双重荧光定量PCR对人工污染的脱脂灭菌乳进行检测。结果成功构建了重组质粒标准品，并运用5’、3’端分别标记FAM、TAMRA的hly基因探针和5’、3’端分别标记HEX、TAMRA的ipaH基因探针成功建立了单增李斯特菌与志贺菌同步荧光定量PCR检测方法。结论建立的方法有较强的特异性，线性范围好（10^5～10^1 copies／ul，R^2≥0．998），灵敏度为10copies／PCR，同步检测人工污染脱脂灭菌乳的灵敏度为10^2CFU／ml。
主 题 词：双重荧光定量PCR 单核细胞增生李斯特菌 志贺菌 食品检测
学科分类：1002[医学-临床医学类] 1010[医学-医学技术类] 100215[100215] 10[医学]
核心收录：
D O I：10.3321/j.issn:0254-5101.2008.10.020
馆 藏 号：203147059...
