利用Gateway技术构建黄瓜HPL基因的RNA干扰载体

作     者：王聪颖 陈书霞 陈巧 郝丽宁 孟焕文 万旭花 申晓青 程智慧 

作者机构：西北农林科技大学园艺学院农业部西北地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室陕西杨凌712100 

基　　金：国家自然科学基金(31071813) 高校基本科研业务费(QN2011088) 西北农林科技大学国际合作基金(A213021102) 陕西省留学人员科技活动项目择优资助经费(A289021202) 

出 版 物：《西北农业学报》 (Acta Agriculturae Boreali-occidentalis Sinica)

年 卷 期：2013年第22卷第2期

页      码：152-158页

摘      要：为探讨黄瓜脂氢过氧化物裂解酶基因(HPL)下调表达对黄瓜果实挥发性醛类物质合成的影响,设计1对特异引物,以黄瓜pDONR201-HPL质粒为模板,通过PCR扩增出323bp的片段。利用基于同源重组原理的Gateway技术,将扩增的片段通过BP反应连接到入门载体pDONR201中。对扩增出的323bp的片段进行测序,测序结果显示该序列与原序列同源性为100%。在此基础上,通过LR反应将目的片段插入过表达的植物RNA干涉载体pHellsgate8,构建黄瓜HPL基因的RNAi表达载体pHellsgate8-HPLi,分别经限制性内切酶XhoⅠ、XbaⅠ酶切后获得323bp的片段,与预期结果一致。采用热击法将pHellsgate8-HPLi转化农杆菌GV3101,经菌液PCR扩增获得323bp的目的条带,表明RNAi表达载体pHellsgate8-HPLi已成功转入农杆菌中。

主 题 词：黄瓜 HPL基因 RNAi干扰 克隆载体 表达载体 Gateway技术 

学科分类：09[农学] 0902[农学-自然保护与环境生态类] 090202[090202] 

馆 藏 号：203147272...