PRPS2基因shRNA质粒的构建与表达

作     者：吴彬 游锦梅 李钰 Yang Yong 陈显久 WU Bin;YOU Jinmei;LI Yu;YANG Yong;CHEN Xianjiu

作者机构：太原钢铁(集团)有限公司总医院中心实验室太原030003 山西医科大学生物化学与分子生物学教研室 山西医科大学第一临床医学院骨科 Department of EpidemiologyMedical BoardSingapore General Hospital 

基　　金：山西省科技(工业)攻关项目基金资助项目(20110321076-02) 山西省国际科技合作基金资助项目(2012081050-1) 

出 版 物：《山西医科大学学报》 (Journal of Shanxi Medical University)

年 卷 期：2014年第45卷第8期

页      码：678-682,783页

摘      要：目的构建磷酸核糖焦磷酸合成酶2(phosphoribosyl pyrophosphate synthetase 2,PRPS2)基因shRNA质粒,为探讨PRPS2基因功能奠定基础。方法设计并合成PRPS2基因shRNA,将其分别与真核表达载体GV102重组为shRNA质粒,分别命名为GV102-PRPS2-1、GV102-PRPS2-2、GV102-PRPS2-3,分别转染这三种载体的细胞设为实验组1、2、3;阴性对照载体命名为GV102-PRPS2-0,转染该载体设为阴性对照组;分别测序鉴定。常规转染人结肠癌HCT116细胞后采用RT-PCR、Western blot检测细胞PRPS2基因的表达水平,筛选干扰效果最佳shRNA载体。结果设计并合成的PRPS2干扰载体,经测序鉴定序列正确。转染HCT116细胞后在72 h内发绿色荧光的细胞数量随时间的增加而增强,转染效率均介于40%-50%。RT-PCR和Western blot结果显示,转染shRNA质粒的3个实验组PRPS2表达均较阴性对照组显著下降(P<0.05),其中GV102-PRPS2-3使细胞中PRPS2的mRNA(0.27±0.05)水平下降73%、蛋白(0.30±0.04)水平下降70%,干扰效果优于GV102-PRPS2-1(mRNA:0.61±0.03,蛋白:0.37±0.06)和GV102-PRPS2-2(mRNA:0.89±0.02,蛋白:0.84±0.05)。结论本研究利用RNAi技术下调了人结肠癌HCT116细胞中PRPS2基因的表达,为深入探讨PRPS2表达下调后对细胞行为的影响奠定了研究基础。

主 题 词：磷酸核糖焦磷酸合成酶2/PRPS2 RNA干扰 HCT116细胞 基因重组 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.13753/j.issn.1007-6611.2014.08.003

馆 藏 号：203147344...