小鼠跨胎盘RNA干扰EphB2基因在先天畸形中的实验研究

作     者：王大佳 唐爽 张志波 苏朋俊 白玉作 袁正伟 王维林 Wang Dajia;Tang Shuang;Zhang Zhibo;Su Pengjun;Bai Yuzuo;Yuan Zhengwei;Wang Weilin

作者机构：中国医科大学附属盛京医院小儿外科沈阳110004 卫生部小儿先天畸形重点实验室 辽宁省农业生物技术重点实验室沈阳农业大学生物科学技术学院 

基　　金：国家自然科学基金(81270436) 辽宁省教育厅科学技术研究一般项目(L2012285) 

出 版 物：《中华小儿外科杂志》 (Chinese Journal of Pediatric Surgery)

年 卷 期：2015年第36卷第9期

页      码：656-660页

摘      要：目的应用跨胎盘RNA干扰技术抑制胚胎鼠EphB2基因，探索研究易感基因在先天性畸形中的作用。方法构建先天性肛门直肠畸形（anorectal malformation，ARM）相关易感基因EphB2下调质粒SiEphB2，设计3个不同位点SiEphB2，通过鼠尾静脉向孕鼠注射SiEphB2质粒，空载体及Ringer’s液。孕鼠在孕9．5d注射，48h后取出胚胎，应用实时定量PCR及Western blotting检测EphB2基因在子代鼠的mRNA和蛋白质表达水平。并观察新生鼠的肛门直肠发育情况。结果在mRNATk平，发现SiEphB2载体注射组（SiEphB2组）EphB2基因表达比较空载体注射组（Vector组）及释液注射组（Ringer’s组）明显降低。Ringer’s组均值为0．99±0．06，Vector组为0．87±0．07；SiEphB2组中，SiEphB2—1组均值为0．27±0．03，SiEphB2—2组为0．34±0．04，SiEphB2—3组为0．42±0．02。SiEphB2组胚胎EphB2基因较Ringer’S组和Vector组分别下调（65．3±6．6）％和（60．6±8．6）％，差异有统计学意义（P〈O．05）。在蛋白质水平，Ringer’s组为1．00±0．05，Vector组为0．93±0．09；SiEphB2组中，SiEphB2—1组为0．20±0．03；SiEphB2—2组为0．33±0．02；SiEphB2—3组为0．39±0．02。SiEphB2组胚胎EphB2基因较Ringer’s组和Vector组分别下调（69．3±7．8）％和（66．9±9．6）％，差异有统计学意义（P〈0．05）。大体观察SiEphB2组胎鼠可见肛门及鼠尾发育，矢状位切片HE染色未见ARM发生。结论胚胎鼠早期跨胎盘RNA干扰是研究基因功能现实可行的研究方法，跨胎盘SiEphB2可下调子代鼠基因。

主 题 词：RNA干扰 基因 抑制 畸形 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100202[100202] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3760/cma.j.issn.0253-3006.2015.09.004

馆 藏 号：203147383...