人源抗狂犬病毒单链二硫键稳定抗体的重组设计与表达

作     者：蔡昆 王慧 包士中 史晶 侯晓军 荫俊 CAI Kun;WANG Hui;BAO Shi-zhong;SHI Jing;HOU Xiao-jun;YIN Jun

作者机构：军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室北京100071 

出 版 物：《微生物学报》 (Acta Microbiologica Sinica)

年 卷 期：2007年第47卷第4期

页      码：673-676页

摘      要：以人源抗狂犬病毒糖蛋白母本单链抗体ScFv为模板,利用PCR点突变分别在重链FR可变区VH(44)和轻链FR可变区VL(100)分别引入一个半胱氨酸,成功构建了重组单链二硫键稳定抗体基因。连接pET22b(+)载体,转化入*** BL21(DE3)得到工程菌,IPTG诱导表达。体外复性并经Ni-NTA亲和层析对目的蛋白ScdsFv进行纯化;利用荧光抗体实验和ELISA检测抗体活性及稳定性。结果表明重组ScdsFv蛋白实现了原核高效表达,通过体外复性和Ni-NTA柱纯化获得纯度大于90%的ScdsFv蛋白。荧光抗体实验和ELISA结果表明ScdsFv具有特异的抗原结合活性,与母本ScFv比较,稳定性有明显提高。这种具有特异抗原结合活性的稳定ScdsFv蛋白的获得为其进一步的功能研究提供了材料。

主 题 词：狂犬病毒 单链二硫键稳定抗体 表达 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 1002[医学-临床医学类] 07[理学] 1001[医学-基础医学] 08[工学] 09[农学] 100102[100102] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3321/j.issn:0001-6209.2007.04.020

馆 藏 号：203147636...