猪IL-2基因的克隆、序列分析及其杆状病毒表达载体的构建

作     者：郭小参 崔保安 陈红英 王彦彬 方剑玉 吕晓丽 王东方 GUO Xiao-can;CUI Bao-an;CHEN Hong-ying;WANG Yan-bin;FANG Jian-yu;LU Xiao-li;WANG Dong-fang

作者机构：河南农业大学牧医工程学院河南郑州450002 河南省动物性食品安全重点实验室河南郑州450002 南京农业大学动物医学院江苏南京210095 

基　　金：国家"十五"食品安全重大攻关专项(2001BA804A30-11) 

出 版 物：《中国兽医学报》 (Chinese Journal of Veterinary Science)

年 卷 期：2009年第29卷第2期

页      码：129-133页

摘      要：参照GenBank发表的猪IL-2 cDNA基因序列设计1对引物,将猪脾淋巴细胞在伴刀豆球蛋白A(Con A)的刺激下体外培养27 h后,提取激活淋巴细胞总RNA,进行反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增,克隆到pGEM-TEasy载体上并测序。测序结果显示,克隆的猪IL-2 cDNA全长为516 bp,开放阅读框(ORF)包含465 bp,编码154个氨基酸,相对分子质量为17 400,等电点为5.27,此cDNA与已报道的猪IL-2同源性为100%,与猫、牛、鸡、犬、鸭、山羊、马、人、家鼠等的IL-2基因进行比较分析,核苷酸同源性分别为83.7%、82.6%、28.2%、80.6%、29.6%、83.4%、81.3%、82.0%和61.5%。将此IL-2基因亚克隆到杆状病毒转移载体pFastBacDual后获得了重组质粒pFBD-IL2,进而转化进含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac中,发生转座作用;经抗性及蓝白斑筛选得到了含猪IL-2基因的重组DNA,将其命名为Bacmid-IL2。本试验为进一步在昆虫细胞中表达猪IL-2基因、开发研制新型免疫佐剂奠定了基础。

主 题 词：猪白细胞介素-2 克隆 序列分析 杆状病毒 

学科分类：090602[090602] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.16303/j.cnki.1005-4545.2009.02.025

馆 藏 号：203148107...