抗人CD28单链抗体基因的构建及在BmN细胞和家蚕中的表达

作     者：朱艳 郑峰丰 陈永井 邱玉华 朱江 ZHU Yan;ZHENG Feng-Feng;CHEN Yong-Jing;QIU Yu-Hua;ZHU Jiang

作者机构：苏州大学生命科学学院苏州215123 苏州大学医学生物技术研究所苏州215007 

基　　金：江苏省自然科学基金(NoBK2004203) 江苏省高校高新技术发展基金(NoJHB05-45)~~ 

出 版 物：《生物工程学报》 (Chinese Journal of Biotechnology)

年 卷 期：2007年第23卷第4期

页      码：577-583页

摘      要：采用TP-PCR法,将抗人CD28单链抗体的重、轻链可变区基因和人工设计的昆虫杆状病毒多角体蛋白基因(ph)偏好的连接肽序列,拼接成抗人CD28单链抗体(抗CD28-ScFv)基因,并将其插入昆虫杆状病毒转移载体pBacPAK8的ph启动子,构建成重组转移载体pBacPAK8/CD28-ScFv。为便于表达产物的纯化,在CD28-ScFv的C端增加了6×Histag序列。通过脂质体介导法将重组转移载体pBacPAK8/CD28-ScFv和线性化病毒Bm-BacPAK6共转染BmN细胞,经空斑分析和蓝白斑筛选,获得重组杆状病毒Bm-BacPAK6 CD28-ScFv。将重组病毒Bm-BacPAK6 CD28-ScFv感染BmN细胞和5龄家蚕,SDS-PAGE和Western Blotting分析表明,在分子量约为28kD处有一表达带。BmN细胞的表达始于24h,表达峰在72h,96h时表达量开始下降,而5龄家蚕的表达始于48h,表达峰在120h。结果证明,抗人CD28单链抗体基因在BmN细胞和家蚕中得到了特异性表达。上述研究成果为抗人CD28基因工程抗体的研制奠定了基础。

主 题 词：CD28 单链抗体 BmN细胞 家蚕 真核表达 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 0831[工学-公安技术类] 1001[医学-基础医学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

核心收录：

D　O　I：10.3321/j.issn:1000-3061.2007.04.003

馆 藏 号：203148553...