利用CRISPR/Cas 9技术构建大肠杆菌aroA基因的敲除系统及其初步应用

作     者：余深翼 赵金荣 郑玲红 朱二鹏 周五朵 吴宝成 YU Shen-yi;ZHAO Jin-rong;ZHENG Ling-hong;ZHU Er-peng;ZHOU Wu-duo;WU Bao-cheng

作者机构：福建农林大学动物科学学院预防兽医实验室福州350002 

基　　金：福建省畜禽新发疫病诊断和防治技术研究(ky0040052) 

出 版 物：《畜牧兽医学报》 (ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA)

年 卷 期：2016年第47卷第4期

页      码：762-770页

摘      要：旨在利用CRISPR/Cas 9新型基因编辑技术构建大肠杆菌aroA基因的敲除系统,并分析其对不同大肠杆菌aroA基因敲除、修复的差异。首先构建靶向aroA基因的CRISPR/Cas 9载体;随后人工设计同源修复供体基因序列,并亚克隆到CRISPR/Cas 9载体中,构建成完整的CRISPR/Cas 9基因敲除体系;将该系统分别应用到大肠杆菌DH10B、DH5α和JM109细胞中,PCR鉴定筛选到的阳性菌株,并回收其扩增条带进行克隆、测序。CRISPR/Cas 9载体的酶切与测序结果均正确,表明载体构建成功;PCR鉴定结果显示,该系统对三种大肠杆菌均能进行aroA基因的有效敲除,敲除效率为46%~58%;测序结果进一步证实目的基因敲除成功。本试验成功构建大肠杆菌aroA基因CRISPR/Cas 9敲除系统,为进一步研究致病菌aroA基因功能及开发减毒大肠杆菌疫苗提供新型、有效的基因敲除工具。

主 题 词：CRISPR/Cas 9系统 大肠杆菌 aroA基因 敲除 同源修复 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.11843/j.issn.0366-6964.2016.04.016

馆 藏 号：203148938...