小鼠烟酰胺单核苷酸腺苷酰转移酶1基因的克隆与表达检测

作     者：赵虹 杨子超 张惊宇 ZHAO Hong;YANG Zi-chao;ZHANG Jing-yu

作者机构：哈尔滨医科大学附属第四医院神经内科150001 

基　　金：黑龙江省自然基金面上项目(200980) 

出 版 物：《中华老年医学杂志》 (Chinese Journal of Geriatrics)

年 卷 期：2011年第30卷第10期

页      码：866-868页

摘      要：目的检测真核表达克隆pcDNA3．1烟酰胺单核苷酸腺苷酰转移酶1（NMNAT1）的水平和有效性。方法采用PCR的方法钓取小鼠源NMNAT1基因的cds全长片段，构建到T载体中，并转接到pcDNA3．1中；同时设计引物进行全基因测序；采用常规的脂质体转染方法转染入Hela细胞系中表达小鼠源NMNAT1基因，通过qPCR和Western blot的方法检测克隆pcDNA3．1-NMNAT1的表达水平和表达有效性，并同时建立小鼠源NMNAT1基因的qPCR和Western blot检测方法。结果成功钓取了小鼠源NMNAT1基因，测序结果显示与数据库序列完全匹配，pcDNA3．1-NMNAT1通过脂质体转染入Hela细胞系，48h以后收取细胞，经过反转录以后进行qPCR检测和Western blot检测，结果显示表达克隆pCDNA3．1-NMNAT1能同时在tuRNA水平和蛋白水平高表达小鼠NMNAT1基因。结论成功从小鼠脑cDNA文库中克隆了NMNAT1基因的全长cDNA，与Pubmed序列完全一致，并构建到真核表达载体上正确表达NMNAT1蛋白质。

主 题 词：硫酸腺苷酰转移酶 基因表达 

学科分类：1001[医学-基础医学] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3760/cma.j.issn.0254-9026.2011.10.021

馆 藏 号：203149338...