菌B49乙醛乙醇脱氢酶基因克隆中的引物设计

作     者：林海龙 任南琪 郑国香 张坤 段志洁 LIN Hai-long;REN Nan-qi;ZHENG Guo-xiang;ZHANG Kun;DUAN Zhi-jie

作者机构：哈尔滨工业大学市政环境工程学院哈尔滨150090 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30470054) 

出 版 物：《哈尔滨工业大学学报》 (Journal of Harbin Institute of Technology)

年 卷 期：2008年第40卷第6期

页      码：865-869页

摘      要：为研究乙醛乙醇脱氢酶基因及其在乙醇发酵生物制氢中的重要作用,采用clustalw对12个菌种的乙醛乙醇脱氢酶蛋白质序列进行多重比对分析,共得到6个保守区,以这6个保守区设计引物,共选用9对简并引物,命名为ADHJ1、ADHJ2、ADHJ3、ADHJ4、ADHJ5、ADHJ6、ADHJ7、ADHJ8、ADHJ9.用这9对引物对B49总DNA进行简并PCR,共有两对引物的扩增得到预期的结果.其PCR产物经pMD18-T克隆转化至大肠杆菌DH5α中,经筛选后测序.结果表明,这两段DNA推导的氨基酸序列与Bacillus cereus的乙醛乙醇脱氢酶基因的相似性最高为69%,证实所克隆的序列为乙醛乙醇脱氢酶基因DNA片段.尽管采用clustalw软件设计ADHJ5简并引物的简并度分别达1048576倍和98304倍,引物长度分别为30 bp和26 bp,但扩增结果特异性强.说明采用clustalw软件设计的简并引物可信度高,同时,也说明简并度不是合理评判简并引物质量的标准.

主 题 词：乙醛乙醇脱氢酶基因 clustalw 生物制氢细菌 简并引物 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 0810[工学-土木类] 1007[医学-药学类] 100705[100705] 07[理学] 0805[工学-能源动力学] 071005[071005] 0812[工学-测绘类] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3321/j.issn:0367-6234.2008.06.006

馆 藏 号：203149390...