慢病毒介导的水牛CD14基因shRNA序列的筛选

作     者：李美青 康超 黄时海 覃兆鲜 路新梅 乔树叶 李湘萍 石德顺 LI Mei-qing;KANG Chao;HUANG Shi-hai;QIN Zhao-xian;LU Xin-mei;QIAO Shu-ye;LI Xiang-ping;SHI De-shun

作者机构：亚热带农业生物资源与保护利用重点国家实验室广西南宁530004 

基　　金：国家转基因生物新品种培育重大专项重点课题(2009ZX 08007-009 B) 

出 版 物：《畜牧与兽医》 (Animal Husbandry & Veterinary Medicine)

年 卷 期：2012年第44卷第12期

页      码：4-9页

摘      要：研究慢病毒载体介导的RNA干扰对水牛CD14基因表达的影响,设计并筛选具有抑制作用的靶序列。将真核表达载体pDsRed-N1-buffaloCD14转染293细胞株,建立稳定表达水牛CD14基因细胞系。同时设计5条水牛CD14 shRNA(319/421/755/970/1 041)以及1条阴性对照序列(NC-1864),构建慢病毒重组质粒pSicoR-GFP-shRNA。采用磷酸钙沉淀法将三质粒共转染293T细胞包装慢病毒,并进行滴度测定。最后,通过对慢病毒感染的pDsRed1-N1-buffalo CD14-293细胞进行QRT-PCR检测,筛选具有抑制效果的shRNA。结果显示:在各感染细胞组中,外源水牛CD14基因mRNA的表达均受到不同程度的抑制,其中,CD14 shRNA-970靶点的干扰效率最高,达到79.3%(P<0.01)。成功筛选出具有较高抑制效果的水牛CD14 shRNA靶序列,为研究CD14基因在布氏杆菌所致炎症反应中的作用,建立家畜布氏杆菌病防治新方法奠定了基础。

主 题 词：布氏杆菌病 水牛CD14 RNA干扰 慢病毒载体 

学科分类：08[工学] 0905[农学-林学类] 09[农学] 0836[0836] 090501[090501] 

馆 藏 号：203149552...