猪A组轮状病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立

作     者：高婉俊 王静 林鸷 曹伟伟 张彦明 GAO Wan-jun;WANG Jing;LIN Zhi;CAO Wei-wei;ZHANG Yang-ming

作者机构：西北农林科技大学动物医学院陕西杨凌712100 

基　　金：教育部高等学校博士点基金项目(博导类)(20110204110015) 

出 版 物：《动物医学进展》 (Progress In Veterinary Medicine)

年 卷 期：2012年第33卷第12期

页      码：47-53页

摘      要：本试验旨在建立一种检测猪A组轮状病毒的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。参考GenBank上登录的猪轮状病毒OSU株的VP6基因序列保守区设计一对特异性引物,通过RT-PCR方法克隆目的基因,并将其连入pMD 19-T Vector,制备阳性标准品,优化反应条件。建立的方法在1.0×102～1.0×109拷贝/μL范围内线性关系良好,反应扩增效率大于90%,扩增相关系数大于0.98。对猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪传染性胃肠炎病毒及猪圆环病毒2型均检测不到荧光信号,表明该方法特异性强。该方法批内和批间变异系数均小于2%,重复性好。结果表明,建立的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法可为A组猪轮状病毒早期感染的诊断及病毒定量分析提供技术支持。

主 题 词：A组轮状病毒 SYBR GreenⅠ 实时荧光定量PCR 猪 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 090601[090601] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 0906[农学-水产类] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1007-5038.2012.12.011

馆 藏 号：203149974...