人源抗HER2单链抗体/轻链恒定区/鱼精蛋白截短体融合蛋白的基因构建、表达及活性鉴定

作     者：王凯 温伟红 王涛 张瑞 秦炜炜 雷小英 杨安钢 WANG Kai;WEN Wei-Hong;WANG Tao;ZHANG Rui;QIN Wei-Wei;LEI Xiao-Ying;YANG An-Gang

作者机构：第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室陕西西安710033 第四军医大学基础部免疫学教研室陕西西安710033 

基　　金：国家重点基础研究发展(973)计划项目(2004CB518805) 国家自然科学基金(30370314 30400379) 

出 版 物：《第四军医大学学报》 (Journal of the Fourth Military Medical University)

年 卷 期：2007年第28卷第7期

页      码：581-584页

摘      要：目的:构建人抗HER2单链抗体(ScFv)/人轻链恒定区(Ck)/鱼精蛋白截短体(tP)融合蛋白基因,在大肠杆菌中表达、纯化并分析该融合蛋白的活性.方法:设计引物扩增人抗HER2单链抗体e23sFv基因和轻链恒定区编码序列(Ck),连接成ScFv/Ck片段,人工合成tP序列,连接于ScFv/Ck末端,构建成ScFv/Ck/tP融合基因,将其克隆入原核表达载体pET32a后,在大肠杆菌BL21(DE3)LysS中诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和Western Blot鉴定后,用Ni-NTA螯合层析介质纯化.细胞ELISA分析ScFv/Ck/tP融合蛋白抗原亲合活性,凝胶迁移实验检测ScFv/Ck/tP融合蛋白与DNA的结合活性.结果:成功构建了人抗HER2ScFv/Ck/tP融合基因,经IPTG诱导后在大肠杆菌中实现了可溶性表达.表达的ScFv/Ck/tP融合蛋白保持了与抗原的结合活性,同时具有结合DNA的能力.结论:ScFv与Ck,tP融合后,同时具有抗原和DNA结合活性,为该ScFv用于HER2阳性肿瘤的靶向基因治疗奠定了基础.

主 题 词：人源抗HER2单链抗体 轻链恒定区 鱼精蛋白 基因构建 活性鉴定 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.3321/j.issn:1000-2790.2007.07.002

馆 藏 号：203150085...