从兔外周血直接克隆B细胞κ轻链的可变区

作     者：周吉航 周世权 王晔恺 曾芳 马利娜 刘晓光 ZHOU Ji-hang;ZHOU Shi-quan;WANG Ye-kai;ZENG Fang;MA Li-na;LIU Xiao-guang

作者机构：舟山医院细胞分子学实验室舟山医院-中国科学院北京基因组研究所免疫基因组学联合实验室浙江舟山316004 

基　　金：浙江省科技计划面上社会发展资助项目(2009C33128) 

出 版 物：《解剖学报》 (Acta Anatomica Sinica)

年 卷 期：2012年第43卷第4期

页      码：479-483页

摘      要：目的从兔外周血总RNA中直接扩增出B细胞κ轻链的可变区序列。方法首先从IMGT/GENE-DB数据库中获取大耳白兔Ig胚系基因Vκ(IGKV)、Jκ(IGKJ)和Cκ(IGKC)的cDNA序列、设计引物,然后以非免疫兔外周血总RNA为模板进行RT-PCR扩增,回收产物并克隆到T载体,随机挑选单克隆测序,最终将序列提交到IMGT/V-QUEST,分析出每个克隆的Vκ-Jκ组合,并利用BioEdit的本地Blast程序比较出Cκ的基因型。结果共设计出4对引物,其中引物对RK.C1[4-5-9]无产物,引物对RK.C1[1-2-7]、RK.C1[3-6-8]和RK.C2[1-2-3-4]有产物,分别回收、克隆到T载体后各挑取20个克隆,共获得51个克隆的插入子序列。没有任何2个克隆的插入子序列完全相同,每个克隆均包含完整的兔Vκ、Jκ及Cκ的5’端序列,其中Vκ-Jκ-IGKC1组合的克隆33个,Vκ-Jκ-IGKC2组合的克隆18个;68个Vκ胚系基因中有22个出现,其中频率最高的是IGKV1S10*01(12次),其次是IGKV1S36*01、IGKV1S37*01和IGKV1S4*01(各5次),其余均为3次以下;8个Jκ胚系基因中只有1个出现,为IGKJ1-2*01;2个Cκ基因的等位基因分别为IGKC1*01和IGKC2*03。33个Vκ-[IGKJ1-2*01]-[IGKC1*01]克隆中有17种不同的组合方式,其中频率最高的为[IGKV1S10*01]-[IGKJ1-2*01]-[IGKC1*01](7次)。18个Vκ-[IGKJ1-2*01]-[IGKC2*03]克隆中有11种不同的组合方式,频率最高的为[IGKV1S10*01]-[IGKJ1-2*01]-[IGKC2*03](5次)。Vκ-Jκ-Cκ组合方式相同的克隆,序列仍具有明显的差异。结论利用自行设计的兼并引物,成功并特异地从兔外周血总RNA中直接扩增出了κ轻链的可变区,且产物具有良好的多样性,但所有Vκ-Jκ-Cκ组合中只出现了1种Jκ基因。

主 题 词：外周血 免疫球蛋白 轻链 可变区 反转录聚合酶链式反应 兔 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 1001[医学-基础医学] 071009[071009] 09[农学] 100102[100102] 0901[农学-植物生产类] 090102[090102] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3969/j.issn.0529-1356.2012.04.008

馆 藏 号：203150310...