RNA干扰技术体外抑制内质网分子伴侣GRP94在卵巢癌细胞表达的研究

作     者：张丽颖 徐爱丽 李佩玲 艾丽敏 

作者机构：哈尔滨医科大学附属第二医院妇产科 哈尔滨市93220部队门诊部 

基　　金：黑龙江省青年科学基金编号:QC2009C82 黑龙江省博士后科研启动金资助编号:LBH-Q11051 黑龙江省卫生厅科研课题编号:2007-320 

出 版 物：《中国优生与遗传杂志》 (Chinese Journal of Birth Health & Heredity)

年 卷 期：2014年第22卷第10期

页      码：16-20页

摘      要：目的利用RNA干扰技术,构建葡萄糖调节蛋白94(GRP94)靶向的RNA干扰质粒载体,观察其对卵巢癌细胞株HO-8910 GRP94基因表达的抑制作用及其对阿霉素(ADM)耐药的逆转作用。方法设计能转录小发卡结构RNA的DNA序列,并与psiSTRIKETM质粒载体连接,构建受控于人RNA聚合酶Ⅲ启动子U6的真核表达载体,将重组质粒导入卵巢癌细胞株HO-8910内,实验分为3组,特异性siRNA组(HO-8910/siRNA组),非特异性siRNA组(HO-8910/NC siRNA组)和空白对照组(HO-8910组),用RT-PCR、Western blot和免疫荧光技术检测GRP94 mRNA及蛋白水平的表达情况,用流式细胞仪检测细胞凋亡,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞对阿霉素化学敏感性的变化。结果成功构建RNA干扰质粒载体,转染针对GRP94的siRNA后24、48、72h,HO-8910的GRP94基因和蛋白水平明显下降;细胞凋亡增加;转染GRP94 siRNA后,HO-8910对阿霉素的敏感性显著增加。结论构建的RNA干扰真核表达载体能明显抑制GRP94 mRNA及蛋白的表达,促进细胞凋亡,通过降低卵巢癌细胞中GRP94的表达能增加其对阿霉素的敏感性,RNAi为卵巢癌的基因治疗提供了一种新策略。

主 题 词：卵巢癌 RNAi GRP94 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.13404/j.cnki.cjbhh.2014.10.006

馆 藏 号：203150423...