基于序列特异扩增区域标记的栗疫菌巢式PCR检测技术

作     者：麻文建 郑磊 张静 刘洋 朱天辉 Ma Wenjian;Zheng Lei;Zhang Jing;Liu Yang;Zhu Tianhui

作者机构：四川农业大学林学院四川雅安625014 

基　　金：教育部博士点基金资助项目(00329701) 

出 版 物：《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 (Journal of Zhejiang University:Agriculture and Life Sciences)

年 卷 期：2015年第41卷第1期

页      码：25-33页

摘      要：为建立栗疫菌(Cryphonectria parasitica)快速、准确的检测技术,利用随机扩增多态性DNA技术(random amplified polymorphic DNA,RAPD)对不同来源地的栗疫菌和其他真菌分离物进行PCR扩增,筛选出栗疫菌的RAPD特异片段SCQ494。将特异RAPD片段SCQ494进行分离、回收,与载体pMD19-T载体连接,转化至大肠埃希菌进行培养,对目标片段克隆测序。根据测序结果,用Primer 5.0软件设计了序列特异扩增区域(sequence characterized amplified region,SCAR)引物CQ1/CQ2和巢式PCR引物CR1/CR2。利用引物CQ1/CQ2通过常规PCR对不同来源地供试栗疫菌可扩增出1条约1 420bp的条带,对其他供试菌株DNA的PCR产物均无此条带,检测灵敏度为3pg/μL的基因组DNA;而以引物CQ1/CQ2为外圈引物和引物CR1/CR2为内圈引物进行的巢式PCR可从栗疫菌基因组DNA中扩增出1条大小约875bp的条带,灵敏度达到30fg/μL,是常规PCR的1000倍。验证实验表明巢式PCR可以从发病程度不同的栗树枝干和在自然感染的栗树枝条中检测出栗疫菌。

主 题 词：栗疫菌 随机扩增多态性DNA技术 序列特异扩增区域 巢式PCR 分子检测 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 1007[医学-药学类] 100705[100705] 07[理学] 09[农学] 0904[农学-动物医学类] 090401[090401] 071005[071005] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3785/j.issn.1008-9209.2015.01.004

馆 藏 号：203150435...