牛源性无乳链球菌分离鉴定及cfb基因的克隆和真核表达载体的构建

作     者：阚威 王华 马友记 赵兴绪 张勇 KAN Wei;WANG Hua;MA You-ji;ZHAO Xing-xu;ZHANG Yong

作者机构：甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 甘肃农业大学动物科学技术学院甘肃兰州730070 

基　　金："十二五"农村领域国家科技计划项目(2011AA10A210) 兰州市科技局科技三项(033143) 

出 版 物：《华北农学报》 (Acta Agriculturae Boreali-Sinica)

年 卷 期：2014年第29卷第5期

页      码：39-44页

摘      要：为研制奶牛乳房炎无乳链球菌的基因工程疫苗,采集隐性奶牛乳房炎奶样,利用THB(Todd-Hewitt Broth)固体选择培养基和色素试验,并结合无乳链球菌种属特异性基因cfb,采用PCR技术从隐性乳房炎奶样中分离和鉴定无乳链球菌。根据GenBank已报道的链球菌cfb基因序列,经ORF分析和B细胞表位预测,利用Primer 5.0软件设计cfb因子富含B细胞表位区域引物,添加酶切位点和真核表达元件,以分离株无乳链球菌的基因组为模板,PCR扩增cfb基因并连接T载体克隆测序,经测序确定无误后,连接pcDNATM3.1 V5-His A(pcDNA-cfb)真核载体,转化DH5α感受态细胞,提取重组质粒进行酶切和测序鉴定。结果显示,从89份隐性奶牛乳房炎奶样中分离得到8株无乳链球菌,成功构建了真核表达载体(pcDNA-cfb)。THB和色素试验初步筛选,可以作为快速分离无乳链球菌的一种方法,利用Bcepred和Lasergene-Protean软件对分离得到的无乳链球菌cfb基因序列分析,在所克隆的cfb基因序列内有多个优势抗原表位,因此,有望作为无乳链球菌基因工程疫苗研制的抗原靶标基因序列,为进一步研究其基因工程疫苗提供基础条件。

主 题 词：奶牛隐性乳房炎 无乳链球菌 cfb基因 真核载体构建 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

核心收录：

D　O　I：10.7668/hbnxb.2014.05.008

馆 藏 号：203150943...