检测动物棘球蚴的3种PCR方法的比较

作     者：周正斌 朱淮民 ZHOU Zheng-bin;ZHU Huai-min

作者机构：第二军医大学病原生物学教研室上海200433 

基　　金：基金项目:国家科技部传染病重大专项(2008ZX10004-011) 

出 版 物：《国际医学寄生虫病杂志》 (International JOurnal of Medical Parasitic Diseases)

年 卷 期：2011年第38卷第3期

页      码：148-153页

摘      要：目的比较多重PCR（multiplex PCR）、PCR一限制性片段长度多态性（PCR—RFLP）、半巢式PCR等3种检测棘球蚴的PCR方法，优化可区分多房棘球绦虫、细粒棘球绦虫羊株（G1型）和骆驼株（G6型）、石渠棘球绦虫和带科绦虫的方法。方法根据细粒棘球绦虫、多房棘球绦虫、石渠棘球绦虫、带科绦虫线粒体基因序列，用DNAStar软件设计半巢式PCR通用引物，建立半巢式PCR法，并与文献报道的多重PCR法、PCR—RFLP平行扩增3份巨颈绦虫囊尾蚴、48份多房棘球蚴、8份细粒棘球蚴样本DNA，比较3种检测方法的特异性和灵敏度，并以细粒棘球蚴组织DNA为模板测定3种方法的灵敏度。结果半巢式PCR法灵敏度最高，59份样本全部扩增出561bp条带，但需要测序才能确定虫种；多重PCR法能扩增出3份巨颈绦虫囊尾蚴（带绦虫）样本（3／3，100％），5份（5／8，62．5％）细粒棘球蚴样本，23份（23／48，47．9％）多房棘球蚴样本，其余28份样本为假阴性；PCR—RFLP扩增细粒棘球蚴、多房棘球蚴和巨颈绦虫囊尾蚴（带科绦虫）的阳性率与多重PCR相同，且PCR—RFLP不能区分细粒棘球绦虫G1型和带科绦虫。统计学分析显示半巢式PCR法的棘球蚴检出率高于PCR—RFLP法和多重PCR法。半巢式PCR法灵敏度分别是PCR—RFLP法和多重PCR法的1000倍和100倍，最低检出细粒棘球蚴DNA浓度为253pg／ul。结论根据不同研究目的，可组合选用多重PCR法、PCR—RFLP法、半巢式PCR法区分细粒棘球绦虫G1型、G6型，多房棘球绦虫，石渠棘球绦虫和带绦虫。

主 题 词：棘球蚴 聚合酶链反应 虫种鉴别 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

D　O　I：10.3760/cma.j.issn.1673-4122.2011.03.005

馆 藏 号：203151787...