应用CRISPR/Cas9基因编辑技术建立miRNA-301a敲除小鼠

作     者：刘宣 季青 李文 周利红 王璇 江海丽 陈静 畅立圣 李琦 

作者机构：上海中医药大学附属曙光医院肿瘤科上海201203 上海中医药大学附属上海市中医医院肿瘤科上海200071 

基　　金：国家自然科学基金(81273958 81303102 81473478 81303103) 上海市科委科技发展基金实验动物专项基金(13140902500 14140901402) 上海市优秀学科带头人计划(XBR2011061) 上海市教委创新项目(12ZZ118 13YZ045) 上海市教育发展基金会晨光计划(13CG47) 上海市卫生局科研基金(20114Y001) 

出 版 物：《第二军医大学学报》 (Academic Journal of Second Military Medical University)

年 卷 期：2015年第36卷第3期

页      码：256-260页

摘      要：目的利用CRISPR/Cas9基因编辑技术建立miRNA敲除小鼠模型。方法根据miRNA基因序列,设计针对miR-301a的gRNA引物序列(双靶点),PCR扩增获得针对miR-301a的体外转录模板DNA和构建Cas9体外转录模板,然后进行Cas9和gRNA体外转录。利用体外转录的gRNA/Cas9mRNA对小鼠受精卵显微注射,并利用T7E1酶切和基因测序对miR-301a突变进行检测和鉴定。结果 PCR扩增、凝胶电泳和基因测序鉴定证实,获得序列正确的用于体外转录的模板DNA;体外转录获得gRNA/Cas9mRNA,顺利完成对小鼠受精卵的显微注射;利用T7E1酶切对miR-301a突变进行检测,发现8只新生小鼠中有7只(87.5%)被鉴定在miR-301a位点携带突变;基因测序结果显示,各小鼠均有不同程度的碱基插入或缺失突变,其中缺失碱基数目最多的4号小鼠产生31个碱基缺失。结论成功建立miR-301a基因高效敲除小鼠模型。

主 题 词：CRISPR/Cas9 基因编辑 miR-301a 基因敲除小鼠 

学科分类：10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3724/SP.J.1008.2015.00256

馆 藏 号：203151979...