促红细胞生成素小干扰RNA真核表达载体的构建

作     者：呼格吉乐 韩艳秋 Hu Gejile;Han Yanqiu

作者机构：内蒙古医科大学附属医院检验科呼和浩特市010050 

基　　金：内蒙古科技厅应用技术研究与开发资金资助项目(20120406) 内蒙古自治区卫生和计划生育委员会医疗卫生科研计划项目(201303062) 

出 版 物：《国际输血及血液学杂志》 (International Journal of Blood Transfusion and Hematology)

年 卷 期：2016年第39卷第1期

页      码：31-34页

摘      要：目的探讨促红细胞生成素（EPO）新靶点的小干扰RNA（siRNA）真核表达载体构建策略。方法设计合成3个EPO siRNA片段，与含有绿色荧光蛋白和卡那霉素抗性的质粒载体连接，转化到JM109大肠埃希菌感受态细胞中，采用碱基序列测序方法鉴定其构建情况。在人脑神经胶质瘤U251细胞株中，转染成功构建的3个EPOsiRNA真核表达载体，采用倒置荧光显微镜，观察U251细胞绿色荧光蛋白表达情况。结果①本研究成功构建了新靶点EPOsiRNA真核表达载体，即P^EPO-1、P^EPO-2。与P^EPO-3，并且构建的3个EPO siRNA真核表达载体序列，与所设计的标准序列完全相同，未发现任何突变、缺失、插入等基因异常情况。②本研究成功将3个EPOsiRNA真核表达载体P^EPO-1、P^EPO-2与P^EPO-3。转染至人脑神经胶质瘤U251细胞内，并且所有转染P^EPO-1、P^EPO-2与P^EPO-3的U251细胞均表达绿色荧光蛋白。结论本研究成功构建新靶点EPO siRNA真核表达载体，并将其转染于人脑神经胶质瘤细胞中，为EPO在贫血等疾病中的作用机制研究奠定了实验基础。

主 题 词：RNA干扰 红细胞生成素 载体 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100201[100201] 10[医学] 

D　O　I：10.3760/cma.j.issn.1673-419X.2016.01.006

馆 藏 号：203152012...