MSTN基因敲低绵羊成纤维细胞株的筛选

作     者：李昊 薛超 张秋婷 王春生 朴善花 宋红卫 安铁洙 LI Hao;XUE Chao;ZHANG Qiu-ting;WANG Chun-sheng;PIAO Shan-hua;Song Hong-wei;AN Tie-zhu

作者机构：东北林业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150040 

基　　金：中央高校基本科研业务费专项资金资助项目(DL13EA06-02) 国家转基因生物新品种培育科技重大专项资助项目(2009ZX08008-004B) 国家自然科学基金资助项目(31000990) 

出 版 物：《中国兽医学报》 (Chinese Journal of Veterinary Science)

年 卷 期：2014年第34卷第12期

页      码：1982-1988页

摘      要：为了获得绵羊MSTN基因敲低成纤维细胞株,克隆获得MSTN基因序列构建其真核表达载体;设计合成并筛选3种MSTN基因干涉序列(M1、M2和M3),构建相应的3种RNA干涉载体;将MSTN基因真核表达载体单独或分别与3种RNA干涉载体共转染绵羊成纤维细胞后,分别检测其对MSTN基因表达的干涉效率以获得最佳的MSTN基因RNA干涉载体;将筛选的RNA干涉载体线性化后转染绵羊成纤维细胞,通过筛选获得转基因细胞株。结果显示,成功克隆得到与GenBank中序列同源性为100%的绵羊MSTN基因序列,并获得真核表达载体pcDNA3.1(+)-MSTN;构建获得MSTN基因RNA干涉载体pRNAT-M1、pRNAT-M2和pRNAT-M3;与单独转染pcDNA3.1(+)-MSTN后293GP细胞中MSTN基因的相对表达量相比,转染干涉载体后MSTN基因相对表达量明显下降,其中pRNAT-M1干涉效率最佳;将pRNAT-M1线性化后转染绵羊成纤维细胞并利用G418筛选获得转基因阳性细胞;获得的转基因阳性细胞的细胞形态、生物学特性均呈现正常;PCR检测结果显示,pRNAT-M1已整合到细胞基因组中。上述结果表明,成功获得了MSTN基因敲低的绵羊成纤维细胞株。

主 题 词：绵羊 成纤维细胞 MSTN基因 RNA干涉 转基因细胞 

学科分类：0905[农学-林学类] 09[农学] 

核心收录：

D　O　I：10.16303/j.cnki.1005-4545.2014.12.024

馆 藏 号：203152071...