RNA干扰技术阻断α-synuclein基因过表达秀导的α-synuclein蛋白病理性积聚的研究

作     者：陈涛 唐北沙 廖小平 文国强 严新翔 郭纪锋 张玉虎 曹立 李静 欧阳锋 龙志刚 

作者机构：中南大学附属湘雅医院神经内科长沙410008 海南省人民医院神经内科长沙410008 

基　　金：国家863高科技研究发展计划(2004AA227040,2002BA711A07) 国家"十五"科技攻关计划(2004BA720A03) 国家自然科学基金(30370515) 海南省自然科学基金(806119) 

出 版 物：《中华医学遗传学杂志》 (Chinese Journal of Medical Genetics)

年 卷 期：2008年第25卷第2期

页      码：128-131页

摘      要：目的构建并筛选针对帕金森病致病基因α-synuclein特异、高效的RNA干扰载体，观察应用RNA干扰技术阻断α-synuclein过表达导致α-synuclein蛋白病理性积聚的作用。方法采用携带Hl启动子的PBSHHl质粒，设计并构建针对α-synuclein基因4个可有效表达发夹状RNA的特异性α-synuclein基因干扰载体pSVNi-1、pYNi－2,pSYNi－3、pSVNi－4，通过限制性内切酶酶切、DNA测序证实后，转染HEK293细胞，应用Western印迹、逆转录－PCR观察干扰载体的有效性，筛选特异、高效的RNA干扰载体。采用脂质2000将筛选的最佳α-synuclein-pBSHI RNA干扰载体及野生型α-synuclein-pEGFP真核细胞表达载体共转染HEK293细胞，并设立对照组，48h后采用Axiovert200型倒置荧光显微镜、荧光免疫细胞化学观察其在细胞内的表达，HE染色观察细胞质内嗜酸性小体的形成。结果Western印迹、逆转录－PCR结果显示，pS,CNi－1载体具有高效的RNA干扰抑制作用，效率达69．6％；将α-synuclein-pBSHHl RNA干扰载体pSYNi-1及野生型α-synuclein-pEGFP真核细胞表达载体转染HEK293细胞，48h后荧光显微镜下观察细胞在波长488nm蓝色激发光下发出明亮的绿色荧光，其中对照组某些细胞质内出现绿色荧光物质积聚，而转染psyni-1干扰组细胞质内绿色荧光物质分布均匀；免疫荧光细胞化学检测结果显示，转染48h后对照组可见α-synuclein免疫阳性产物在胞浆内聚集，转入RNA干扰载体pYNi-1后胞浆内α-synuclein免疫阳性产物分布均匀；HE结果显示，转染48h后，对照组某些细胞质内出现圆形的嗜酸性小体（类Lewy小体）形成；转入RNA干扰载体pSVNi-1后胞浆内未见类Lewy小体形成。结论RNA干扰技术通过抑制α-synuclein基因的表达，成功阻断了野生型α-synuclein过表达所诱导的α-synuclein蛋白病理性积聚，为最终应用RNA干扰技术临床治疗帕金森病提供了某些依据。

主 题 词：RNA干扰 α-synuclein基因 蛋白积聚 帕金森病 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100210[100210] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3321/j.issn:1003-9406.2008.02.002

馆 藏 号：203153189...