实时荧光定量PCR检测布鲁杆菌方法的应用

作     者：张宏霞 祈文学 刘文兴 胡森 于占水 杜美兰 薛维国 步志高 ZHANG Hong-xia;QI Wen-xue;LIU Wen-xing;HU Sen;YU Zhan-shui;DU Mei-lan;XUE Wei-guo;BU Zhi-gao

作者机构：黑龙江省巴彦县疾病预防控制中心151800 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 黑龙江省农垦总局总医院 

基　　金：哈尔滨市科技创新人才研究专项资金项目 

出 版 物：《中国地方病学杂志》 (Chinese Jouranl of Endemiology)

年 卷 期：2009年第28卷第5期

页      码：476-479页

摘      要：目的探讨实时荧光定量PCR（FQ—PCR）用于布鲁杆菌检测的可行性。方法根据布鲁杆菌BCSP31基因设计合成1对引物和TaqMan探针，以克隆有布鲁杆菌基因片段的PMD18-T质粒作为标准品DNA模板，进行FO—PCR检测，绘制标准曲线；对所应用的方法分别进行敏感性、特异性及重复性分析；并对临床血液标本进行FQ—PCR，与临床诊断进行比较。结果用标准品DNA建立的定量标准曲线的循环阈值（Ct）与模板拷贝数呈良好的线性关系（r=0．999）；FQ—PCR检测的灵敏度拷贝数为5个／μl，普通PCR为5×102个／μl，FQ—PCR是普通PCR的100倍；用FQ-PCR检测6株布鲁杆菌菌株及5株非布鲁杆菌菌株，布鲁杆菌均检出较强荧光信号，非布鲁杆菌未检出；5×10^3个拷贝／μl标准品DNA检测后，Ct值批内变异系数（CV）为0．71％，批间CV为7．23％；用FQ—PCR检测临床确诊阳性血标本24份，检出阳性19份，符合率为79％（19／24），阴性对照血标本31份，全部阴性，阴性符合率为100％（31／31），临床症状可疑标本30份，检出阳性2份。结论用FQ—PCR方法检测布鲁杆菌具有高度敏感性、特异性及良好的重复性，与临床阳性及阴性标本的符合率较高。可用于快速检测各种样本中的微量布鲁杆菌以及作为布鲁杆菌感染的实验室检测方法。

主 题 词：布鲁杆菌 聚合酶链反应 检测 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 1004[医学-公共卫生预防医学类] 1002[医学-临床医学类] 1001[医学-基础医学] 100210[100210] 10[医学] 

D　O　I：10.3760/cma.j.issn.1000-4955.2009.05.002

馆 藏 号：203153253...