实时荧光定量PCR检测猪源Mx1方法的建立及应用

作     者：张小敏 周斌 何丹妮 庞然 赵津 陈溥言 

作者机构：南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095 

基　　金：国家自然科学基金青年基金项目(31001062) 江苏高校优势学科建设工程资助项目 

出 版 物：《南京农业大学学报》 (Journal of Nanjing Agricultural University)

年 卷 期：2013年第36卷第1期

页      码：92-96页

摘      要：根据GenBank中的猪源抗病毒蛋白Mx1基因(poMx1)序列设计1对特异性引物,从Mx1基因全长片段中扩增和克隆了特异性的115 bp核苷酸片段。测序鉴定正确后将重组质粒进行定量并10倍倍比稀释作为扩增模板,通过SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法,建立Mx1的标准曲线及回归方程。结果显示:该标准曲线的回归方程为Y=-2.986 3 lg X+38.239 3(R2=0.998 5),灵敏度为1×102μL-1;应用该方法对猪瘟兔化弱毒苗接种猪肾细胞(PK-15)后产生的poMx1 mRNA进行定量分析,发现病毒感染细胞4 h后,poMx1的表达量最高(P<0.01),然后随着时间的增加而缓慢减少。结论:建立的SYBRGreenⅠ实时荧光定量PCR方法可以检测poMx1 mRNA的表达水平。

主 题 词：猪源Mx1 实时荧光定量PCR 标准曲线 

学科分类：090603[090603] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

馆 藏 号：203153406...