水甘油通道蛋白9短发夹RNA的构建与筛选及其对非酒精性脂肪性肝病细胞模型的作用

作     者：王川 亢渝俊 姜政 王丕龙 WANG Chuan;KANG Yu-jun;JIANG Zheng;WANG Pi-long

作者机构：重庆市第三人民医院消化内科400014 重庆医科大学附属第一医院消化内科 

基　　金：国家自然科学基金面上项目(81070318)重庆市卫生局医学科研资助项目(渝卫科2010-2-100) 

出 版 物：《中华肝脏病杂志》 (Chinese Journal of Hepatology)

年 卷 期：2013年第21卷第3期

页      码：222-227页

摘      要：目的构建人水甘油通道蛋白9（AQP9）短发夹RNA（shRNA），筛选出沉默效果明显的重组质粒，检测AQP9的shRNA对非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）细胞模型的作用。方法设计合成针对人AQP9的小干扰RNA，退火形成双链shRNA后插入pGensil-1质粒中，并将其转染L02肝细胞，逆转录一聚合酶链反应（RT-PCR）及Westem blot筛选出沉默效果明显的重组质粒。经油酸诱导L02细胞脂肪变性建立NAFLD细胞模型，通过油红O染色，测定甘油三酯、游离脂肪酸及甘油含量，检测重组质粒对NAFLD细胞模型的作用。数据比较采用方差分析。结果经RT-PCR及Westem blot筛选，pshRNA—AQP9a转染组mRNA及蛋白质相对表达率为25．10％士1．19％及25．41％±1．96％，与未处理L02细胞组的39．33％±1．69％及35．08％±1．89％相比，均明显降低∽值均〈0．01）；将重组质粒pshRNA-AQP9a转染NAFLD细胞模型能够降低其AQP9的mRNA及蛋白质表达量；油红O染色结果显示，油酸／pshRNA-AQP9a转染组细胞内脂质含量明显减少。油酸／pshRNA-AQP9a转染组细胞内甘油三酯、游离脂肪酸及甘油含量分别为（2．738±0．231）mmol／L、（1．182±0．168）mmol／L和（0．730±0．084）mmol／L，油酸组分别为（3．218土0．220）mmol／L、（1．538±0．193）mmol／L及（1．024±0．148）mmol／L，油酸／pshRNA-AQP9a转染组均明显降低（尸值均〈0．05）。结论降低AQP9表达量能够减轻NAFLD细胞模型的脂肪变l生程度，为进一步研究AQP9对NAFLD的基因治疗奠定基础。

主 题 词：水甘油通道蛋白质类 RNA干扰 基因沉默 短发夹RNA 脂肪肝 非酒精性 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100201[100201] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3760/cma.j.issn.1007-3418.2013.03.015

馆 藏 号：203153411...