白曲霉酸性蛋白酶在黑曲霉中表达

作     者：李杰 吴婷 马南 王欣 杨建乐 李健友 张会 LI Jie;WU Ting;MA Nan;WANG Xin;YANG Jianle;LI Jianyou;ZHANG Hui

作者机构：东北农业大学生命科学学院哈尔滨150030 

基　　金：黑龙江省应用技术研究与开发计划重大项目(GA15B203) 

出 版 物：《东北农业大学学报》 (Journal of Northeast Agricultural University)

年 卷 期：2016年第47卷第5期

页      码：29-35页

摘      要：研究分析固态发酵酸性蛋白酶生产菌株及其产品,ITS序列鉴定结果表明,该菌株为曲霉属,质谱分析结果表明其产品为Aspergillus saitoi酸性蛋白酶Aspergillopepsin I（EC.3.4.23.18）。根据Aspergillus saitoi酸性蛋白酶Aspergillopepsin I基因序列pep1（GI：473517）设计引物,以固态发酵酸性蛋白酶生产菌株基因组DNA为模板,利用PCR技术扩增获得pep1基因。序列分析结果表明,扩增片段与白曲霉Aspergillus kawachii酸性蛋白酶基因组序列相似性为99%,其编码蛋白与白曲霉Aspergillus kawachii酸性蛋白酶（GAA90749.1）相似性为100%,将该基因命名为pep B。构建黑曲霉表达载体p SZHG-pep B,通过农杆菌介导法转化黑曲霉CICC2462,筛选得到在gla A位点发生同源重组纯合转化子。经摇瓶发酵后,对产物进行SDS-PAGE、酶活检测以及酸性蛋白酶酶学性质和酶稳定性研究。结果表明,纯合同源重组菌株经SDS-PAGE检测时在47 ku左右处有明显目的蛋白条带,其发酵产物酸性蛋白酶酶活达5 543 U·m L-1,为出发菌株152倍。对菌株所产酸性蛋白酶酶学性质研究发现,该酶最适反应温度为50℃,最适反应p H 3.0,在4℃和25℃条件下,酶在p H 3.0~4.0时较稳定。

主 题 词：酸性蛋白酶 黑曲霉 同源重组 分泌表达 

学科分类：08[工学] 09[农学] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1005-9369.2016.05.005

馆 藏 号：203153558...