MCFP慢病毒干涉载体及HepG2稳定细胞系的构建

作     者：笪倩 于淼 杨晓明 汪思应 

作者机构：中国人民解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所北京市100850 安徽医科大学病理生理学教研室安徽省合肥市230032 

基　　金：国家重点基础研究发展计划(973计划)基金资助项目 No.2006CB910802 国家高技术研究发展计划(863计划)基金资助项目 No.2006AA02A310~~ 

出 版 物：《世界华人消化杂志》 (World Chinese Journal of Digestology)

年 卷 期：2011年第19卷第11期

页      码：1115-1121页

摘      要：目的:研究线粒体转运蛋白质超家族新成员SLC25A40(MCFP)RNA干扰(RNAi)慢病毒表达载体对人肝癌细胞系HepG2细胞中MCFP基因的沉默效果.方法:通过RNAi序列设计软件进行MCFP干涉片段设计,筛选出MCFP基因的RNAi有效靶序列,进一步合成靶序列的OligoDNA,构建pSiCoR-MCFP慢病毒载体并包装产生慢病毒干涉毒液.运用病毒感染HepG2细胞获得稳定干涉MCFP的细胞株,利用PCR和Westernblot方法检测稳定细胞株中MCFP的干涉效果.结果:成功构建具有MCFP干涉效果的慢病毒干涉载体并获得了稳定干涉MCFP及对照的HepG2细胞株.收集慢病毒上清,流式测定干涉病毒滴度为1.45×1010pfu/L,对照病毒滴度为1.78×1010pfu/***和Westernblot实验均证实干涉MCFP后,HepG2细胞株中MCFP蛋白表达水平明显降低(P<0.001).结论:成功构建具有MCFP干涉效果的慢病毒干涉载体及稳定干涉MCFP的HepG2细胞株.

主 题 词：慢病毒 线粒体转运蛋白超家族成员 RNA干扰 人肝癌细胞系HepG2 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

馆 藏 号：203154854...