基于单标记探针实时荧光定量PCR和熔解曲线分析方法定量检测HBeAg阳性患者前C区变异株

作     者：涂文辉 侯伟 张瑾 吕莹 王瑾瑜 张咏梅 张轶俊 刘红艳 朱浩翔 秦艳丽 毛日成 张继明 TU Wen-hui;HOU Wei;ZHANG Jin;Lü Ying;WANG Jin-yu;ZHANG Yong-mei;ZHANG Yi-jun;LIU Hong-yan;ZHU Hao-xiang;QIN Yan-li;MAO Ri-cheng;ZHANG Ji-min

作者机构：上海复旦大学附属华山医院感染科200040 浙江省台州市立医院感染科 浙江省台州市立医院检验科 复旦大学附属公共卫生临床中心 

基　　金：国家"十二五"传染病重大专项(编号:2012ZX10002007-001-002 2013ZX10002001) 国家自然科学基金项目(编号:81071354) 

出 版 物：《肝脏》 (Chinese Hepatology)

年 卷 期：2013年第18卷第5期

页      码：297-302页

摘      要：目的建立一种HBV复杂前C区变异株精确定量的检测系统。方法分两步实时PCR完成检测。首先应用野生株阻断探针(WT-blocker probe)进行选择性抑制野生株病毒的扩增,而含量偏低的变异株病毒得以扩增约10000倍,使其在后续反应中易于检出;第二步应用单标记探针(Simple Probe)结合熔解曲线分析系统精确定量检测前C区G1896A、G1899A、G1896A/G1899A变异株。通过PBPPO(primer-blocker-probe partial-overlap)设计减少基因多态性对检测的影响,来提高检测精确度。检验结果经直接测序及聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析方法予以证实。结果 4种标准质粒(G1896/G1899、G1896A、G1899A、G1896A/G1899A)能够很好地被检出并予以区分,突变检测灵敏度达到0.01%;10例HBeAg阳性(直接测序法鉴定前C区变异阴性)患者血清标本中,每例至少1种前C区变异株被检出。结论单标记探针实时荧光定量PCR和熔解曲线分析能够早期灵敏检测前C区变异株,前C区变异株进化过程及机制还需进一步大样本、纵向队列研究予以阐明。

主 题 词：乙型肝炎病毒 单标记探针 熔解曲线分析 前区变异 定量检测 

学科分类：1004[医学-公共卫生预防医学类] 100401[100401] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1008-1704.2013.05.004

馆 藏 号：203154957...