猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF7基因实时荧光定量PCR检测方法的建立

作     者：安乐乐 罗迅 杨宣叶 胡欣妍 赵永清 AN Lele;LUO Xun;YANG Xuanye;HU Xinyan;ZHAO Yongqing

作者机构：西北民族大学生物医学研究中心甘肃兰州730030 西北民族大学生命科学与工程学院甘肃兰州730100 

基　　金：甘肃省自然科学基金项目(21JR1RA221) 兰州市科技计划项目(2023-1-31) 中央高校基本科研项目(31920220050) 

出 版 物：《江苏农业学报》 (Jiangsu Journal of Agricultural Sciences)

年 卷 期：2024年第40卷第9期

页      码：1681-1688页

摘      要：为建立一种快速、高效检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的实时荧光定量PCR方法,本研究根据GenBank公布的中国流行PRRSV病毒株基因序列,制备包含PRRSV ORF7基因的重组质粒标准品,同时,针对PRRSV保守区域ORF7基因序列设计特异性引物和探针,并优化引物和探针终浓度,建立PRRSV Taq Man实时荧光定量PCR检测方法。以质粒标准品为模板构建检测方法线性模型,评估灵敏度、重复性和特异性,并在疑似临床样品中初步应用。本研究建立的PRRSV Taq Man荧光定量PCR检测方法线性关系良好,线性决定系数为0.9975;病毒载量检测限度为1μL 3.32×10^(1)拷贝;变异系数在组内和组间重复中均小于1.500%;仅与PRRSV发生特异性反应,未与其他病毒发生交叉反应。临床样品qPCR检测阳性率为36.92%,高于PCR检测阳性率(26.15%),阳性符合率为100%。基于PRRSV ORF7基因构建的Taq Man荧光定量PCR检测方法线性关系良好、灵敏度高、重复性好、特异性强,可快速、高效检测临床样品PRRSV,为PRRSV早期诊断、及时防控和流行病学调查提供了科学的技术支撑。

主 题 词：猪繁殖与呼吸综合征 ORF7基因 Taq Man实时荧光定量PCR 早期诊断 

学科分类：090603[090603] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.3969/j.issn.1000-4440.2024.09.012

馆 藏 号：203155403...