高保真CRISPR/Cas9系统在家禽细胞中的编辑特性研究

作     者：焦丹荣 马梦雪 何柏水 谢龙 左二伟 JIAO Dan-rong;MA Meng-xue;HE Bai-shui;XIE Long;ZUO Er-wei

作者机构：山西农业大学动物科学学院晋中030801 中国农业科学院深圳农业基因组研究所(岭南现代农业科学与技术广东省实验室深圳分中心)深圳518000 河南大学生命科学学院开封475004 

基　　金：国家自然科学基金项目(32371549) 

出 版 物：《生物技术通报》 (Biotechnology Bulletin)

年 卷 期：2024年第40卷第10期

页      码：191-197页

摘      要：【目的】高保真编辑器有望大范围降低传统CRISPR/Cas9系统在家禽基因编辑过程中发生的脱靶效应(off-target),但是其在家禽的应用目前仍然缺乏数据支持。为了评估高保真编辑器在家禽细胞中靶向(on-target)的编辑效果与脱靶特性,从而对家禽的分子遗传育种和种质资源利用提供有效参考。【方法】选取5种目前已被报道且具有较高精确性的高保真Cas9变体,分别与设计的sgRNA共同对鸡的DF-1细胞进行转染,收集阳性细胞进行基因测序,并对不同的高保真编辑器进行编辑效率与脱靶效应的平行对比。【结果】在针对禽流感抗性相关基因ANP32B和生殖相关基因DAZL的多个sgRNA测试中,eCas9维持较高的编辑活性的同时表现出了较低的脱靶效应。同时,在检测的多种高保真变体中,SuperFiCas9具有最低脱靶效应,但是在家禽DF-1细胞的基因编辑中会发生明显的编辑效率下降。【结论】多种高保真编辑器在家禽细胞内均展现编辑活性,其中eCas9编辑器具有高效、低脱靶的特性,可作为鸡重要经济性状的遗传改良和分子育种工作的优选高保真编辑工具。

主 题 词：鸡 高保真编辑器 靶向 脱靶 ANP32B 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 0905[农学-林学类] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

核心收录：

D　O　I：10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2024-0673

馆 藏 号：203155541...