沙眼衣原体转录激活因子GrgA与RNA聚合酶β＇亚基的相互作用

作     者：石禹 包小峰 窦志华 SHI Yu;BAO Xiaofeng;DOU Zhihua

作者机构：南通市第三人民医院南通大学附属南通第三医院药学部南通226006 南通大学医学院南通226006 

基　　金：国家自然科学基金(31370209) 南通市卫生健康委员会面上指令课题(MS2022064) 

出 版 物：《医学研究与战创伤救治》 (Journal of Medical Research & Combat Trauma Care)

年 卷 期：2024年第37卷第9期

页      码：897-903页

摘      要：目的研究沙眼衣原体基因转录调控过程中转录激活因子GrgA与RNA聚合酶(RNAP)β 亚基相互作用的关系。方法制备沙眼衣原体RNA聚合酶(cRNAP)NH-β (N末端携带His标签)质粒:根据GenBank中的基因序列设计特异性引物,以衣原体基因组DNA(gDNA)为模板,聚合酶链式反应技术(PCR)扩增cRNAPβ 亚基的基因片段;采用同源重组法将基因片段插入到目的载体上构建表达质粒,同样方法制备β 亚单位和缺失亚单位质粒;cRNAPβ 亚基蛋白(包括亚单位和缺失亚单位)的表达:将构建的质粒转化ArcticExpress表达菌中,采用考马斯亮蓝染色法鉴定蛋白表达情况;cRNAPβ 亚基及其亚单位蛋白的纯化:采用固定化离子亲和层析法(IMAC)纯化得到相应蛋白;借助体外蛋白结合实验(Pull-down技术)、聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及蛋白质印迹法(Western blot)分析鉴定出GrgA与cRNAPβ 亚基两者间相互结合的较为详细的某一段氨基酸序列。结果GrgA能与cRNAP的β 亚基结合;GrgA与cRNAP的β 亚基N端的(1-731)氨基酸序列有结合,与C端的(671-1396)氨基酸序列无结合。GrgA与β 亚基的(1-240)和(181-417)氨基酸序列有结合;与β (360-598)、β (533-731)氨基酸序列无结合。GrgA与β △(1-180)和β △(241-417)有结合,与β △(1-417)无结合。结论GrgA能与cRNAP的β 亚基结合;cRNAP的β 亚基与GrgA的结合存在2个结合位点,分别位于β 亚基N末端的1-180和241-417位氨基酸序列。

主 题 词：沙眼衣原体 cRNAP GrgA β'亚基 相互作用 融合蛋白 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

D　O　I：10.16571/j.cnki.2097-2768.2024.09.001

馆 藏 号：203155861...