siRNA与dsRNA在白纹伊蚊体内的干扰效果

作     者：吴启星 姜玉庭 刘露 郭晓霞 郭思含 张瑞香 邢丹 赵彤言 郭文峰 WU Qixing;JIANG Yuting;LIU Lu;GUO Xiaoxia;GUO Sihan;ZHANG Ruixiang;XING Dan;ZHAO Tongyan;GUO Wenfeng

作者机构：广州中医药大学青蒿研究中心广东广州510405 病原微生物生物安全全国重点实验室北京100071 

基　　金：病原微生物生物安全全国重点实验室开放研究基金资助项目(No.SKLPBS2231) 

出 版 物：《中国热带医学》 (China Tropical Medicine)

年 卷 期：2024年第24卷第11期

页      码：1411-1418页

摘      要：目的探究siRNA(小干扰RNA)和dsRNA(双链RNA)2种干扰RNA在白纹伊蚊体内作用效果以及对蚊虫生存的影响,为蚊虫基因功能研究、新型杀虫剂研发、媒介蚊虫控制与虫媒病防控提供方法参考与技术支持。方法针对感兴趣的白纹伊蚊基因,设计合成目的基因的siRNA交由公司合成,dsRNA则通过扩增目的基因片段、体外转录和纯化方式获取,最终通过琼脂糖凝胶电泳检测验证。利用胸腔显微注射技术将干扰RNA注入白纹伊蚊体内,通过荧光定量聚合酶链反应(quantitative polymerase chain reaction,qPCR)法检测注射后第3天的蚊虫样本基因表达量,验证干扰RNA的干扰效果,同时记录蚊虫生存曲线。结果针对10个基因的22对siRNA干扰实验中,与对照组相比,仅有SR-C-2 siRNA、ENR-1 siRNA 2对siRNA成功干扰靶基因表达,干扰率分别为58%和33%,其余siRNA无干扰效果,甚至出现靶基因表达量升高的情况。dsRNA干扰实验中,Mesh dsRNA在3×10^(11)个RNA分子/只浓度下可显著降低靶基因的表达,干扰效果可持续5 d,注射后第3天的干扰率在55%~60%,注射后第5天的干扰率为34%。dsRNA注射后蚊虫3 d内生存率显著高于siRNA注射组。结论羽化后第5日的白纹伊蚊最适宜接受胸腔注射操作。dsRNA较siRNA干扰稳定,注射后生存率更高,更适用于蚊虫基因功能的深入研究。基于siRNA的基因干扰方法更简便易行,但需注重siRNA的纯化方式以及与该蚊种其他基因的同源性情况,避免由于结合蚊虫体内非靶标基因而出现非特异性实验结果。

主 题 词：白纹伊蚊 RNA干扰 小干扰RNA 双链RNA 

学科分类：1004[医学-公共卫生预防医学类] 100401[100401] 10[医学] 

D　O　I：10.13604/j.cnki.46-1064/r.2024.11.19

馆 藏 号：203155891...