CX3 CR1^(GFP)报告基因小鼠的构建、鉴定及效率检测

作     者：赵鑫鑫 黄蓉 陈露云 黄春梅 涂佳杰 王鑫铭 Zhao Xin-xin;Huang Rong;Chen Lu-yun;Huang Chun-mei;Tu Jia-jie;Wang Xin-ming

作者机构：安徽医科大学药学院安徽医科大学第一附属医院药剂科安徽合肥230032 安徽医科大学临床药理研究所安徽合肥230032 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(No 82104185) 安徽省教育厅高等学校科学研究重点项目(No 2022AH051153) 安徽省自然科学基金资助项目(No 2008085QH400) 抗炎免疫药物教育部重点实验室开放课题资助项目(No KFJJ-2020-03) 安徽医科大学校科研基金资助项目(No2021xkj148) 2024年中青年教师培养行动学科(专业)带头人培育项目(No DTR20240006) 

出 版 物：《中国药理学通报》 (Chinese Pharmacological Bulletin)

年 卷 期：2024年第40卷第12期

页      码：2392-2398页

摘      要：目的 基于Cre/Loxp系统构建CX3CR1^(GFP)基因小鼠,并分析CX3CR1^(GFP)表达效率。方法 通过以限制酶为基础的克隆技术设计靶向载体,用线性化的靶向载体转染胚胎干细胞(embryonic stem,ES),将筛出缺失新霉素抗性基因(neomycin resistance gene,neo)的重组ES细胞克隆注入囊胚中产生嵌合CX3CR1^(+/GFP)小鼠,与野生型小鼠(wild type mice,WT)交配,反复回交得到CX3CR1^(GFP/GFP)小鼠。分别提取WT和CX3CR1^(GFP)小鼠DNA及mRNA,使用琼脂糖凝胶电泳鉴定基因型,RT-qPCR检测小鼠不同组织中CX3CR1的表达水平;Western blot分析GFP蛋白对外周血中的单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)及不同组织中CX3CR1的表达;流式细胞术检测骨髓中免疫细胞的标记效率;免疫荧光观察小鼠不同组织中GFP的表达情况。结果琼脂糖凝胶电泳结果表明,转基因小鼠基因型为CX3CR1^(GFP/GFP)纯合子。RT-qPCR和Western blot结果表明,增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)已靶向取代CX3CR1基因,因此在CX3CR1^(GFP)小鼠中CX3CR1表达极低,而GFP表达明显上调;流式细胞术和免疫荧光显示,GFP有效标记CX3CR1^(GFP)小鼠,在不同组织及不同细胞均有表达且表达具有差异。结论 本研究构建并鉴定CX3CR1^(GFP)基因报告小鼠,且GFP在小鼠体内稳定表达。为进一步揭示CX3CR1在免疫调节中的潜在机制研究提供动物模型基础。

主 题 词：CX3CR1 EGFP Cre/Loxp 流式细胞术 免疫荧光 类风湿关节炎 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 1001[医学-基础医学] 07[理学] 100102[100102] 071007[071007] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.12360/CPB202407056

馆 藏 号：203155994...