树干毕赤酵母木糖还原酶Lysine270定点突变的理性设计

作     者：曾琦锴 林影 翟志臣 林小琼 杜红丽 Zeng Qi-kai;Lin Ying;Zhai Zhi-chen;Lin Xiao-qiong;Du Hong-li

作者机构：华南理工大学生物科学与工程学院广东广州510006 

基　　金：广东省自然科学基金资助项目(06300199) 

出 版 物：《华南理工大学学报（自然科学版）》 (Journal of South China University of Technology(Natural Science Edition))

年 卷 期：2009年第37卷第6期

页      码：79-83页

摘      要：Lysine270是树干毕赤酵母木糖还原酶(PsXR)与还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸(NADPH)或还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)形成结合口袋的关键氨基酸之一.为研究该位点对PsXR辅酶偏好性的影响,用其它19种氨基酸替代Lysine270,构建19种不同的木糖还原酶(XR)突变子,利用同源建模和分子对接的方法评价不同突变子与NAD+或NADP+之间的相互作用,并从中选择突变子K270R和K270N进行实验验证.突变基因及野生基因用异丙基-β-d-硫代半乳糖苷(IPTG)在大肠杆菌内进行诱导表达,经纯化后进行酶学性质研究.结果发现:K270R突变使得XR与NADP+的结合能力降低,米氏常数Km由0.025mmol/L升高到0.050mmol/L;K270N突变使得XR与NADP+不能结合.实验结果亦证实,通过理性选择得到的K270N突变子的辅酶依赖性由NADPH完全逆转为NADH.

主 题 词：木糖还原酶 定点突变 辅酶偏好性 生物信息学 

学科分类：07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 090102[090102] 0710[理学-生物科学类] 0810[工学-土木类] 0832[0832] 0805[工学-能源动力学] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 082203[082203] 0822[工学-核工程类] 0812[工学-测绘类] 083203[083203] 

核心收录：

D　O　I：10.3321/j.issn:1000-565X.2009.06.016

馆 藏 号：203156099...